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硝酸还原酶（NR）活性检测试剂盒说明书
微量法
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 诱导剂储备液：用蒸馏水 10 倍稀释后使用，即取 10mL 诱导剂储备液加 90mL 蒸馏水，充分混匀。现配现用。
2、 试剂二：临用前加入 2 mL 提取液溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融。-20℃保存 2 周。
产品说明：
NR（EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。
NR 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋+H2O，NADH 在 340nm 下有特征吸收峰，340nm 下吸光值的变化即可表示酶活。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者＝增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可）避光，浸泡 2h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻 30min，取出样本，滤纸吸干。（一般不需要诱导处理，预实验结果没有活性则需要进行诱导处理）
2、称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液，冰浴研磨，4000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 EP 管中加入下列试剂）
三、NR 活性计算
注意事项：
1、 当测定的吸光值大于 1.5 或者 ΔA 大于 0.5 时，建议将上清液稀释后测定。
2、 ΔA 测定过小（小于 0.01），可延长酶促反应时间。
3、 建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。
4、 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过 0.05。
实验实例：
1、 取 0.1g 小叶黄杨加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释 2 倍，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定管=A1 测定管-A2 测定管=1.4285-1.1089=0.3196，ΔA 空白管=A1 空白管-A2空白管=0.8794-0.8334=0.046，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.3196-0.046=0.2736，按样本质量计算酶活得：
NR（U/g 质量）= 5.359×ΔA÷W×2（稀释倍数）=5.359×0.2736÷0.1×2=29.3244 U/g 质量。
2、 取 0.1g 玉兰加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释 2 倍，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定管=A1 测定管-A2 测定管=1.4696-1.0602=0.4094，ΔA 空白管=A1 空白管-A2 空白管= 0.8794-0.8334=0.046，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.4094-0.046=0.3634，按样本质量计算酶活得：
NR（U/g 质量）= 5.359×ΔA÷W×2（稀释倍数）=5.359×0.3634÷0.1×2=38.9492 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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