UDPG焦磷酸化酶（UPG）检测试剂盒微量法 微量法

UDPG 焦磷酸化酶（UGP）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格: 100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加 15 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存 2 周。

2. 试剂二：临用前加 2.5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后 4℃保存，禁止反复冻融，4℃保存 1 周。

3. 试剂三：临用前加 1.4 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存 2 周。

4. 试剂四：临用前每支加 1 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存 2周。

5. 工作液的配制：将试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五：试剂六按体积比=600：100：20：40：100：250混合，现用现配。

产品说明：

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP，EC 2.7.7.9）在自然界广泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG），UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式，作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。

UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖，其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接检测。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：

三、UGP 酶活计算

注意事项：

1、 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。

2、 A大于0.6或者A2测定大于1.5时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（5min或10min）来测定。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！