组织无机磷含量检测试剂盒微量法 微量法

组织无机磷含量检测试剂盒说明书

 微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂三：临用前配制，加入 5 mL 蒸馏水，充分溶解后加入 2.5mL 试剂二，混匀；

2、 标准品：1mmol/L 无机磷标准液。

产品说明：

无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等等，此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。

钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量。

技术指标：

最 低检出限：0.0302 mmol/L

线性范围：0.625-8 mmol/L

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：

一、无机磷提取（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

取约 0.1g 组织，加试剂一 1mL 冰上充分匀浆，4℃，10000rpm，离心 10min，取上清液，待测。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2. 打开水浴锅，调节温度到 40℃。

3. 测定：

混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，分别记为 A 空白管、A 标准管、A测定管。注意：需在 40min 内完成比色。

三、组织无机磷含量计算

注意事项：

1、试剂三需临用前配制，限当天使用。

2、测定前先用 1~2 个样本做预实验，如吸光值大于 1.5，需用蒸馏水做相应稀释。

实验实例：

1、 取 0.1g 肾脏加入 1mL 试剂一，离心取上清之后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得 A 测定=0.696，A 空白=0.051，A 标准=0.282，按样本质量计算无机磷含量得：

无机磷含量(mmol/g 质量)= 0.001×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W= 0.001×(0.696-0.051)÷(0.282-0.051)÷0.1= 0.028 mmol/g 质量。

2、 取 0.1g 肝脏加入 1mL 试剂一，离心取上清之后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得 A 测定=0.578，A 空白=0.051，A 标准=0.282，按样本质量计算无机磷含量得：

无机磷含量(mmol/g 质量)= 0.001×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W= 0.001×(0.578-0.051)÷(0.282-0.051)÷0.1= 0.023 mmol/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！