支链淀粉含量检测试剂盒 微量法

支链淀粉含量检测试剂盒说明书

微量法

注意:本产品试剂有所变动，请注意井严格按照该说明书操作。

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：乙醚 100 mL 自备。

2、 试剂四：提供 125 mL 空瓶一个；将试剂三：H2O =9 mL：91 mL 混匀，现用现配，2-8℃保存半年。

3、 标准品：10 mg 支链淀粉。临用前加入 0.1 mL 无水乙醇和 0.9 mL 试剂三，混匀后封口膜封口，沸水浴至溶解，即 10 mg/mL 的支链淀粉，2-8℃保存半年。

产品说明：

支链淀粉又称胶淀粉，一般由几千个葡萄糖残基组成，淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响。

支链淀粉和碘形成红紫色络合物，利用乙醇分开样本中的可溶性糖和淀粉，再用碘与其反应得到支链淀粉含量。

技术指标:

最 低检出限：0.0193 mg/mL

线性范围：0.025-1 mg/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、乙醚、无水乙醇、EP 管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、 称取 0.005g 烘干样本，加入 1mL 试剂一，充分匀浆；

2、 80℃水浴提取 30min，3000g，25℃离心 5min，弃上清，留沉淀；

3、 在步骤 2 沉淀中加入 1mL 试剂二（乙醚）振荡 5min；3000g，25℃离心 5min，弃上清，留沉淀；

4、 在步骤 3 沉淀中加入 5mL 试剂四充分溶解，90℃水浴 10min，冷却后 3000g，25℃离心 5min，取上清待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节双波长至 530nm 和 755nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：将 10 mg/mL 的标准溶液用试剂四稀释至 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05 mg/mL 标准溶液待测。

3、 标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需 40μL 标准溶液。

4、 操作表：(在 1.5mL 离心管中或 96 孔板中依次加入下列试剂)

三、支链淀粉含量计算

1、 标准曲线的建立

以支链淀粉标准溶液浓度为 x 轴（x，mg/mL），标准溶液对应的 ΔA 标准为 y 轴（y，ΔA 标准），建立标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA 测定带入方程得到 x（mg/mL）。

2、 支链淀粉含量（mg/g 质量）=x×V 样总÷W=5x÷W

V 样总：加入试剂四体积，5mL；W：样本质量，g。

注意事项：

1、 反应后建议在 20min 内检测完成防止褪色。

2、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

实验实例：

1 取 0.01g 大米于研钵中研碎，加入 1mL 试剂一，进行样本处理，取上清 3 倍稀释后按照测定步骤操作，用 96孔板测得计算 ΔA 测定=（A 测定-A 空白）-（A’测定-A’空白）=（0.351-0.059）-（0.190-0.048）=0.150，带入标准曲线 y=0.5157x+0.0089 计算 x=0.2736，按样本质量计算含量得：

支链淀粉含量（mg/g 质量）=5x÷W×3（稀释倍数）=410.4 mg/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！