半胱氨酸(Cys)含量检测试剂盒 微量法

半胱氨酸（Cys）含量检测试剂盒说明书

 微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1．试剂二：用前一天，向试剂二中加 2 mL 蒸馏水充分溶解，再加磷酸 0.5 mL，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴 2h；冷却后加 8 mL 蒸馏水，4℃可保存 2 周。（一瓶即可做 100T，为延长试剂盒使用时间，故多给一瓶）

2．标准品：10 mg 半胱氨酸。将标准品加入 4.13mL 蒸馏水，可得到 20μmol/mL 的标准液。4℃可以保存 4 周。

产品说明：

蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸（Cys）。其中，Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。

Cys 还原磷钨酸生成钨蓝，在 600nm 处有吸收峰；通过测定 600nm 吸光度，计算 Cys 含量。

技术指标：

最 低检出限：0.0066 μmol/mL

线性范围：0.03125-3 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备仪器和用品：

低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、 液体样本中半胱氨酸提取：取 0.2mL 液体样本，加提取液 0.3mL，充分混匀，11000rpm 4℃离心 10min，取上清液待测。

2、 组织中半胱氨酸提取：称取约 0.2g 组织，加入提取液 0.5mL，冰上充分研磨，11000rpm 4℃离心 10 min，取上清液待测。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 600nm，蒸馏水调零。

2. 标准液的配制：用蒸馏水稀释为 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL 浓度的标准溶液。

3. 按下表加入各试剂

三、半胱氨酸含量计算

注意事项：

如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！