土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒 微量法

土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 10 mL 试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用；

2、 试剂三：临用前加入 10 mL 蒸馏水充分溶解待用；

3、 标准液：20 μmol/mL 酪氨酸溶液。

产品说明：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器及用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水、研钵、30-50目筛。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液的稀释：将20μmol/mL 酪氨酸标准液用蒸馏水稀释100倍至0.2μmol/mL使用，现用现配。

3、 样本测定：

三、土壤中性蛋白酶活性计算

单位定义：每天每g土样中产生1μmoL酪氨酸为一个土壤中性蛋白酶活力单位。

土壤中性蛋白酶(U/g 土样)=C标准管×ΔA测定÷ΔA标准×V反总÷W÷T= 0.05×ΔA测定÷ΔA标准÷W

C标准管：标准管浓度，0.2μmol/mL；V反总：酶促反应总体积，0.25mL；T：反应时间，1d；W：样本质量，g。

注意事项：

当吸光值大于1.5时，建议将上清液用蒸馏水稀释后进行测定，计算时注意乘以稀释倍数。

实验实例：

1、 分别取 2 份 0.05g 森林土样于 1.5mLEP 管中，分别为对照管及测定管，按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 ΔA测定=A 测定管-A 对照管=0.582-0.355=0.227，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.374-0.045=0.329，按土壤质量计算酶活得：

土壤中性蛋白酶(U/g 土样)= 0.05×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W = 0.05×0.227÷0.329÷0.05=0.69 U/g 土样。

2、 分别取 2 份 0.05g 三叶草土于 1.5mLEP 管中，分别为对照管及测定管，按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.23-0.177=0.053，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.374-0.045=0.329，按土壤

质量计算酶活得：

土壤中性蛋白酶(U/g 土样)= 0.05×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W = 0.05×0.053÷0.329÷0.05= 0.1611 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！