二胺氧化酶活性检测试剂盒 微量法

二胺氧化酶（DAO）活性检测试剂盒说明书

 微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否

溶液的配制：

1、 试剂二：液体置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用前加入 4mL 蒸馏水溶解，4℃可保存 1 个月。

产品说明：

DAO (EC1.4.3.6)广泛存在于动物（肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等）、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛，其活性与核酸和蛋白合成密切相关，能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢，外源添加过量的辣根过氧化物酶，催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质，在 500nm 处有特征吸收峰，通过测定该波长吸光度增加速率，计算 DAO 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水、无水乙醇、水浴锅。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

二、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。

2. 操作表

三、酶活性计算公式

注意事项：

1、 如果 ΔA 小于 0.01，适当加大提取用样本质量；OD 值大于 0.8，样本可用提取液适当稀释，或者减少提取用样本质量。

2、 样本蛋白质含量需要另外测定。

实验实例：

1、 取 0.1g 肝脏加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上，之后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定-A 对照=0.135-0.125=0.01，按样本质量计算酶活得：

DAO（U/g 质量）=30×ΔA÷W=3 U/g 质量。

2、 取 0.1g 冬青加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上，之后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定-A 对照=0.139-0.126=0.013，按样本质量计算酶活得：

DAO（U/g 质量）=30×ΔA÷W=3.9 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！