抗坏血酸/总抗坏血酸含量检测试剂盒 可见分光光度法

抗坏血酸/总抗坏血酸（AsA/T-AsA）含量检测试剂盒（比色法）说明书

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入 3.3 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂-20℃分装避光保存。

2、 试剂六：临用前加入 12 mL 70%乙醇（V/V）溶液溶解。

3、 标准品：临用前配制，加入 1.136mL 提取液充分溶解；吸取 0.01 mL 上述溶液，加入 0.99 mL 提取液，混匀，即 500 nmol/mL AsA 标准溶液。

产品说明:

抗坏血酸（AsA）是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。脱氢抗坏血酸（DHA）是 AsA 的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统，具有电子受体作用。

AsA 具有还原性，能将 Fe³⁺还原成 Fe²⁺，Fe²⁺与 2,2’-联吡啶形成粉红色络合物，在 525nm 处有特征性吸收峰。DTT 可还原 DHA 生成 AsA，可用于检测样本总抗坏血酸（AsA+DHA）含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

研钵/匀浆器、冰、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液器、乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）: 提取液体积(mL)为 1: 5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液）进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心 10 min，取上清置冰上待测。

2. 细胞或细菌：按照细胞数量（10⁴个）: 提取液体积（mL）为 500~1000 ：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300 W，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3 min）；13000g，4℃离心 10min，取上清液置冰上混匀待测。

3. 血清等液体：取 500 μL 样本，加入 500 μL 提取液，漩涡混匀。13000g，4℃离心 10 min，取上清置冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 525 nm，蒸馏水调零。

2. AsA 含量测定

AsA 含量测定操作表，按照操作表加入下列试剂：

3. T-AsA 含量测定

T-AsA 含量测定操作表，按照操作表加入下列试剂：

 注意：加入试剂七时将枪头伸入液面以下加入，不可悬空滴加，否则会导致液体浑浊。空白管 1、空白管 2及标准管只需测定 1-2 次。

三、AsA /T-AsA 含量计算公式

注意事项：

1. 加入试剂七时将枪头伸入液面以下加入，不可悬空滴加，否则会导致液体浑浊。

2. 空白管 1、空白管 2 及标准管只需测定 1-2 次。

3. A 大于 1 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算时乘以相应的稀释倍数。

4. 本试剂盒可单独用于检测样本中 AsA 或 T-AsA 含量，也可在同时检测 AsA 与 T-AsA 含量后计算 DHA 含量。

5. 样本提取后当天检测。

实验实例：

1、取 0.1g 冬枣进行样本处理，按照测定步骤操作，测得计算 ΔA1测定管=（A 测定管-A 对照管）-(A 空白管 1-A空白管 2）=（0.44-0.019）-（0.025-0.009）=0.402、ΔA1标准管=A 标准管-A 空白管 1=0.341-0.024=0.317，ΔA2测定管=（A 测定管-A 对照管）-(A 空白管 1-A 空白管 2）=（0.591-0.020）-（0.024-0.008）=0.555、ΔA2标准管=A 标准管-A 空白管 1=0.375-0.024=0.351，按照样本质量分别计算 AsA 含量及 T-AsA 含量得：

AsA(nmol/g 质量)=500×ΔA1 测定管÷ΔA1标准管÷W=6340.7 nmol/g 质量

T-AsA(nmol/g 质量) =500×ΔA2测定管÷ΔA2标准管÷W=7905.9 nmol/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！