6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活性检测试剂盒 微量法

6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格:100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：用时每支加 250 μL 双蒸水充分溶解备用；

2、 试剂三：用时每支加 250 μL 双蒸水充分溶解备用。

3、 工作液配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三以 15：0.2：0.2 比例混合。

产品说明：

G6PDH（EC 1.1.1.49）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是磷酸戊糖途径的关键酶，催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将 NADP⁺还原为 NADPH，供生物合成及维持细胞内的还原状态用。因此 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。G6PDH 催化 NADP⁺还原生成 NADPH，在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞或组织样本的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 340nm，蒸馏水调零。

2、试剂一置于 37℃水浴预热 30min 以上。

3、加样表：

三、G6PDH 活力单位的计算

注意事项：

1、 实验时，样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一 37℃水浴放置。

2、 比色皿中反应液的温度必须保持 37℃，取小烧杯一只装入一定量的 37℃蒸馏水，将此烧杯放入 37℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

3、 最 好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。

4、 若样本测定初始值（0s）大于 0.5 而 ΔA 测定小于 0.1，可将样本稀释后再行测定。

5、 使用 96 孔板测定时，因是根据反应速率计算酶活，为保证每个样本的反应时间尽量一致不推荐同时测过多样本。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！