过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒 微量法

过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒说明书

 微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：丙酮自备。

2、 试剂二：临用前加入 3 mL 浓盐酸充分溶解备用，用不完的试剂 4℃保存。

3、 标准品：1 mmol/mL H₂O₂标准液。

产品说明：

H₂O₂是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H₂O₂不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H₂O₂可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H₂O₂也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。

H₂O₂与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。

技术指标：

最 低检出限：0.0027 μmol/mL

线性范围：0.0195-3 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、浓盐酸、研钵/匀浆器和冰。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

细菌或细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织样本的制备：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样本：按照每 100μL 血清（浆）加入 0.9mL 试剂一的比例充分混匀；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂二、三和四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

3、 如果用96孔板将则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为2μmol/mL的标准溶液，用微量玻璃比色皿则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为1μmol/mL的标准溶液。

4、 在EP管中按顺序加入下列试剂

注意事项：

1、 由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。

2、 本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。

3、 如果样本吸光值大于 1.1，建议将样本用试剂一稀释后进行测定。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！