维生素B1（VB1）含量检测试剂盒 微量法

维生素 B1（VB1）含量检测试剂盒说明书

微量法

规格: 100/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀；

2、标准品：10mg 维生素 B1。临用前加入 1mL 稀释液，配成 10mg/mL（即 10000μg/mL）的标准液。

产品说明：

维生素B1（Vitamin B1）又称硫胺素，以辅酶形式参与糖的分解代谢，在生物体能量代谢中有重要的作用。

VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与Fe³⁺在弱酸条件下生成普鲁士蓝，测定布鲁士蓝在704nm下的特征吸收峰，即可反映VB1的含量。

技术指标：

最 低检出限：0.057 μg/mL

线性范围：1.953-250 μg/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：将样本磨碎，按照质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，13000g 离心 10min，取上清测定（动物组织、豆类种子等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至上清无浑浊）。

2、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；加蒸馏水 0.4mL，混匀后于25℃，13000g 离心 10min，取上清测定。

3、液体：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至704nm，蒸馏水调零。

2、 将10mg/mL（10000μg/mL）标准液用稀释液稀释为250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL的标准溶液备用。

3、 操作表（在1.5mL EP管中进行下列操作）：

三、维生素B1含量计算

注意事项：

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2. 蛋白浓度较高的样本，比如动物组织，豆类种子等建议将样本稀释20倍或40倍后再测定并在计算公式中乘以稀释倍数。

3. 显色完成后立即进行测定，若显色完成后有沉淀产生，将其摇匀后测定。

实验实例：

1、 称取 0.1g 肝脏，加入 0.6mL 提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，13000rpm 离心 10min，取上清，将上清稀释 40 倍之后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 ΔA= A 测定管-A 空白管=0.551-0.107=0.444，带入标准曲线 y=0.0054x+0.0043，计算 x=81.43μg/mL，按样本质量计算 VB1 含量得：

VB1（μg/g 质量）= x×V 样总÷W×40（稀释倍数）=81.43×1÷0.1×40=32572 μg/g 质量。

2、 称取 0.1g 稗草，加入 0.6mL 提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，13000rpm 离心 10min，取上清，将上清稀释 40 倍之后按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 ΔA= A 测定管-A 空白管=0.727-0.107=0.62，带入标准曲线 y=0.0054x+0.0043，计算 x =114.02 μg/mL，按样本质量计算 VB1 含量得：

VB1（μg/g 质量）= x×V 样总÷W×40（稀释倍数）=114.02×1÷0.1×40=45608 μg/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！