植物类黄酮含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 提取液:自备 60%乙醇,常温保存;
2、 标准品:10 mg 芦丁。临用前加入 1 mL 标准品稀释液配制成 10 mg/mL 标准液备用,2-8℃保存四周。
产品说明:
类黄酮是一类多苯化合物,属于植物次生代谢物,对人体具有消炎,抗菌,降血脂,清除体内羟自由基,预防癌症等作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中,类黄酮与铝离子形成在470nm处有特征吸收峰的红色络合物,测定样本提取液在470nm处的吸光值,即可计算样本类黄酮含量。
技术指标:
最 低检出限:0.00818 mg/mL
线性范围:0.0097-5 mg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、烘箱、粉碎仪、30-50目筛、超声清洗仪、60%乙醇、台式离心机、研钵、蒸馏水、水浴锅/恒温培养箱。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
将样本烘干至恒重,粉碎,过 30-50 目筛之后,称取约 0.1g,加入 1mL 提取液,用超声提取法进行提取,超声功率 300W,温度 60℃,提取 30min。12000rpm,25℃,离心 10min,取上清,用提取液定容至 1mL,待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至470nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2. 标准溶液的制备:将10mg/mL芦丁标准溶液用标准品稀释液稀释至2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039mg/mL备用,具体稀释可参考下表。
3. 操作表
三、类黄酮含量计算
1. 根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。
2. 按样本质量计算
类黄酮含量(mg/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W。
3. 按样本蛋白浓度计算
类黄酮含量(mg/mg prot)=x×V提取÷(Cpr×V提取) =x÷Cpr
V提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。
注意事项:
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
2. 显色完成后立即测定,2小时后吸光值会下降。
实验实例:
1、 取 0.1g 处理的葡萄皮加入 1mL 提取液后超声破碎,取上清按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定-A 对照=0.365-0.116=0.249,带入标曲 y=0.3144x+0.0009,得出 x=0.789,按样本质量计算含量得:
类黄酮含量(mg/g 质量)=x÷W=0.789÷0.1=7.89mg/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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企业名称
上海博尔森生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
91310117MA1J4K3L3L
成立日期
2020-09-02
注册资本
100
经营范围
一般项目:从事生物科技、医药科技领域內的技术开发、技术咨询、技术服务;仪器仪表、实验室设备及耗材、玻璃制品、电子产品、第一类医疗器械、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)销售;货物或技术进出口(国家禁止或涉及行政审批的货物和技术进出口除外)
上海博尔森生物科技有限公司
公司地址
松江区石湖荡镇石湖新路95号
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