双缩脲法蛋白含量检测试剂盒 可见分光光度法

双缩脲法蛋白质含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格: 50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

提取液：自备。根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水。

产品说明:

样本可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

强碱性溶液中，双缩脲与CuSO₄形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该方法适用于蛋白质浓度高的样本，尤其是动物材料。

技术指标：

最 低检出限：0.1304 mg/mL

线性范围：0.5-10 mg/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

离心机、可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、液体样本：澄清无色液体样本可以直接测定。

2、组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即待测液。（动物样本常常需要稀释）

3、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min，调节波长到540nm，蒸馏水调零。

2、 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸馏水，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A空白管。

3、 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL标准液，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A标准管。

4、 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL待测液，1000μL试剂一，混匀后室温静置15min，于540nm比色，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定 1-2 次。

三、样本中蛋白质浓度计算

注意事项：

1、 样本蛋白浓度须在0.5~10mg/mL范围内，低于0.5mg/mL不能用此法，高于10mg/mL须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在0.5~10mg/mL范围内。

2、 如果吸光值大于0.44，则需要将样本用蒸馏水稀释后再测定。

3、 待测样本蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰，提取液中应不含这些物质；否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！