果糖-1,6-二磷酸（FDP）含量检测试剂盒微量法 微量法

果糖-1,6-二磷酸（FDP）含量检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 0.3mL 蒸馏水，充分溶解后待用，用不完的试剂 4℃保存，4℃保存一周；

2、 标准品：临用前加入 1176 μL 蒸馏水充分溶解，配制成 50 μmol/mL 果糖-1,6-二磷酸标准溶液。

产品说明：

果糖 1,6-二磷酸（fructose-1,6-diphosphate, FDP）是糖酵解过程中的一种重要的中间产物，对多种酶具有调节作用，具有改善细胞能量代谢、增加能量利用、抗心律失常及抗组织过氧化等作用，广泛应用于临床医药。

醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸裂解，产物与 2,4-二硝基苯肼在酸性介质中反应生成 2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色，在 540nm 处有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10min后取上清待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10min后取上清待测。

3. 血清（浆）：取100μL血清（浆）加入1mL提取液一，4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.16mL提取液二，4℃，12000g离心10min后取上清待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 将50μmol/mL的果糖-1,6-二磷酸标准液用蒸馏水倍比稀释为3.125、1.5625、0.78125、0.39、0.2、0.1 μmol/mL的标准溶液备用。

3、 样本测定：(在1.5 mL离心管或96孔板中操作)

三、FDA 含量计算

注意事项：

当ΔA测定大于0.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！