蔗糖合成酶（分解方向SS-I）活性检测试剂盒 微量法

蔗糖合成酶（分解方向；SS-I）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格: 100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 2.5 mL 试剂一充分溶解待用，用不完的试剂建议分装后，-20℃保存，避免反复冻融；

2、 标准品：20 mg 果糖，临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解，配成 20 mg/mL 果糖溶液备用，4℃保存一周。

产品说明：

蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代谢过程的关键酶，负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应，其分解活性可以催化蔗糖水解成 UDPG 与果糖， 参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。

分解方向 SS-I 催化蔗糖和 UDP 生成果糖与 UDPG，果糖与 3,5 –二硝基水杨酸反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定 540nm 处吸光值变化可计算得 SS-I 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，8000g，离心 10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、 将 20mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 8、6、5、4、3、2、1mg/mL 的标准溶液备用。

3、 操作表 (在 1.5mL 离心管中操作) ：

三、SS-I活性计算

注意事项：

1. 当 A 或 ΔA 超过 1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。

2. 95℃水浴时 EP 管盖紧，防止水分散失，待冷却至室温后（建议每次实验后冷却时间保持一致），再进行下一步操作，避免液体飞溅烫伤以及影响试验数据。

实验实例：

1. 取 0.1g 黑麦草加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 A 对照管=0.111，A测定管=0.408，标准曲线y =0.1231x-0.0365，A空白管=0.050，计算ΔA=A测定管-A对照管=0.408-0.111=0.297，x=(0.297+0.0365) ÷0.1231=2.7092，按样本质量计算酶活得：

SS-I 酶活（U/g 质量）=33.33x÷W=33.33×2.7092÷0.1= 902.976 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！