Ca++Mg++——ATP酶活性检测试剂盒 微量法

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂三：临用前取 1 支加入 1 mL 蒸馏水充分混匀待用；现用现配。用不完的试剂-20℃分装保存一周。

2、 试剂六：临用时加入 5 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。

3、 试剂七：临用时加入 5 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。

4、 标准品：10mmol/L 标准磷贮备液。将标准品 20 倍稀释，即取 0.1 mL 标准品加 1.9 mL 蒸馏水充分混匀，配成 0.5 μmol/mL 标准磷应用液，现用现配。

5、 定磷剂的配制：按 H₂O：试剂六：试剂七：试剂八=2:1:1:1 比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据样本量现用现配。

注意：配试剂最 好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

产品说明：

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/

匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，可见分光光度计需用蒸馏水调零。

2、 酶促反应（在EP管中加入下列试剂）

3、 定磷（在EP管或96孔板中加入下列试剂）

注意事项：

1、 由于每一个样都必须做对照，本试剂盒 100 管只能测 48 份 Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶。

2、 此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。避免磷污染是检测成败的关键。

实验实例：

1、 取 0.1g 胰腺加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清置冰上，按照测定步骤操作，使用 96孔板测得 ΔA 测定=0.535-0.238=0.297，ΔA 标准=0.280-0.043=0.237，按样本质量计算酶活得：

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶活力(U/g 质量) =7.5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=93.99 U/g 质量。

2、 取 0.1g 柳树加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清置冰上，按照测定步骤操作，使用 96孔板测得 ΔA 测定=0.105-0.099=0.006，ΔA 标准=0.280-0.043=0.237，按样本质量计算酶活得：

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP 酶活力(U/g 质量) =7.5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=1.90 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！