H2S含量检测试剂盒 微量法

硫化氢（H₂S）含量检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

产品说明：

硫化氢（H₂S）是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的 H₂S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。其在植物中也具有促进种子萌发、调节植物气孔、增强光合作用等作用，同时还会影响植物体内的氧化还原平衡和物质代谢。

H₂S 与 N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算 H₂S含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 细菌或培养细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液一体积（mL）=500-1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min），12000g 4℃离心 10min；然后取 0.8mL 上清液，再加入 0.15mL提取液二，12000g 4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

2. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液一体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液一），进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心 10min；然后取 0.8mL 上清液，再加入 0.15mL 提取液二，12000g 4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清（浆）或其它液体样本：取 100μL 血清（浆）或其它液体加入 1mL 提取液一，12000g 4℃离心 10min；然后取 0.8mL 上清液，再加入 0.15mL 提取液二，12000g 4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 665nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 加样表（按顺序在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂）

充分混匀，室温静置 10min 后，665nm 处测定各管吸光值 A，分别记为 A 测定、A 空白，计算 ΔA=A 测定-A空白。（空白管只需做 1~2 管）

三、H₂S 含量计算

1、用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线回归方程 y = 0.0026x-0.0268（其中 ΔA 为纵坐标 y，标准溶液浓为横坐标 x），将 ΔA 带入公式中得到 x（nmol/mL）。

（1）按照样本质量计算

H2S 含量（nmol/g 质量）= x×（V 上清+V 提取液二）÷ （W×V 上清÷V 提取液一）=1.1875×x÷W

（2）按照细胞数量计算

H2S 含量（nmol/10⁴ cell）= x×（V 上清+V 提取液二）÷ （cells×V 上清÷V 提取液一）=1.1875×x÷cells

（3）按照液体体积计算

H₂S 含量（nmol/mL）= x×（V 上清+V 提取液二）÷ [V 液体×V 上清÷（V 提取液一+V 液体）]=13.0625×x

V 上清：提取时上清液的体积：0.8mL；V 提取液一：加入提取液一的体积：1mL；V 提取液二：加入提取液二的体积：0.15mL；V 样本：反应液中加入样本的体积，0.05mL；W：样本质量，g；cells：细胞数量，10⁴个；V 液体：液体样本体积：0.1mL。

2、用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线回归方程 y = 0.0020x-0.0633（其中 ΔA 为纵坐标 y，标准溶液浓为横坐标 x），将 ΔA 带入公式中得到 x（nmol/mL）。

（1）按照样本质量计算

H₂S 含量（nmol/g 质量）= x×（V 上清+V 提取液二）÷ （W×V 上清÷V 提取液一）=1.1875×x÷W

（2）按照细胞数量计算

H₂S 含量（nmol/10⁴ cell）= x×（V 上清+V 提取液二）÷ （cells×V 上清÷V 提取液一）=1.1875×x÷cells

（3）按照液体体积计算

H₂S 含量（nmol/mL）= x×（V 上清+V 提取液二）÷ [V 液体×V 上清÷（V 提取液一+V 液体）]=13.0625×x

V 上清：提取时上清液的体积：0.8mL；V 提取液一：加入提取液一的体积：1mL；V 提取液二：加入提取液二的体积：0.15mL；V 样本：反应液中加入样本的体积，0.05mL；W：样本质量，g；cells：细胞数量，10⁴个；V 液体：液体样本体积：0.1mL。

注意事项：

1、如果 ΔA 值过低或接近空白值，建议增加样本量后再进行测定；如果 ΔA＞1.2，建议稀释样本后再进行测定，计算公式中要乘以相应的稀释倍数。

实验实例：

1、 称取 0.1g 小鼠肝脏按照样本提取步骤处理，按照测定步骤操作，使用 96 孔板测定 665nm 处反应液吸光度，计算 ΔA = A 测定-A 空白=0.150-0.121=0.029，将 ΔA 代入标准方程 y = 0.0020x-0.0633，R² = 0.9951，计算得 x；按样本质量计算得：

H2S 含量（nmol/g 质量）= x×（V 上清+V 提取液二）÷ （W×V 上清÷V 提取液一）=548.03nmol/g 质量。

2、 称取 0.1g 紫叶李按照样本提取步骤处理，按照测定步骤操作，使用 96 孔板测定 665nm 处反应液吸光度，计算 ΔA = A 测定-A 空白=0.270-0.121=0.149，将 ΔA 代入标准方程 y = 0.0020x-0.0633，R² = 0.9951，计算得 x；按样本质量计算得：

H₂S 含量（nmol/g 质量）= x×（V 上清+V 提取液二）÷ （W×V 上清÷V 提取液一）=1260.53nmol/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！