琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒 微量法

琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂四：临用前加入到试剂三中溶解待用；

2、 试剂五：临用前加入 4 mL 双蒸水，用不完的试剂仍 4℃保存；

3、 试剂六：临用前加入 3.333 mL 双蒸水，用不完的试剂 4℃保存。

产品说明：

SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表SDH酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g 离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定

在加入试剂六的同时开始计时，在 600nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 1 分 20 秒时的吸光度 A2，计算 ΔA=A1-A2，得到 ΔA 测定、ΔA 空白。

三、SDH 活性的计算

注意事项：

1、 测定过程中所有试剂和样本在冰上放置，以免变性失活。

2、 若ΔA大于0.5（比色皿）/0.3（96孔板），需将酶液用酶提取液稀释，使ΔA小于0.5/0.3，可提高检测灵敏度。

3、 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

实验实例：

1、 取 0.1g 肾脏加入 1mL 试剂一和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器匀浆充分研磨，4℃11000g 离心 10min，取上清置冰上。按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定=A1 测定-A2 测定=0.7838-0.6414=0.1424，ΔA空白=A1 空白-A2 空白=1.019-1.019=0，按样本质量计算酶活得：

SDH 活性（U/g 质量）=961.905×（ΔA 测定-ΔA 空白）÷W=1369.75 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！