尿酸酶活性检测试剂盒 微量法

尿酸酶活性检测试剂盒说明书

微量法

规格:100T/48S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶加入 2 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃保存 1 周。

2、 试剂三：临用前加入 6 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃保存 4 周。

3、 试剂四：临用前加入 4 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂 2-8℃保存 4 周。

4、 试剂五：粉剂置于瓶内玻璃管中。临用前加入 6 mL 试剂一，充分混匀后备用；用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。

5、 标准品：临用前加入 898 μL 蒸馏水得到 1 mmol/mL 的过氧化氢溶液，2-8℃保存 4 周。

6、 工作液 A 的配制：用于样本测定管、空白管及标准管的检测，按照试剂二 : 试剂三 : 试剂四 :试剂五 : 试剂六= 1 : 1 : 1 : 1 : 2 的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议 2 小时内用完。

7、 工作液 B 的配制：用于样本对照管的检测，按照试剂二 : 试剂三 : 试剂四 : 试剂五 : 试剂一= 1 : 1 : 1 :1 : 2 的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议 2 小时内用完。

产品说明：

尿酸酶，又名尿酸氧化酶，是一种参与嘌呤降解途径的氧化酶，可以将尿酸分解为尿囊酸素进而排出体外。尿酸为嘌呤代谢的终末产物，积累过多将导致通风、肾病、心血管疾病等多种疾病的发生。尿酸酶在尿酸相关疾病的临床检测以及治疗中有着重要意义。

尿酸酶催化尿酸分解为尿囊素、CO₂和 H₂O₂，H₂O₂氧化亚铁氰化钾中的 Fe²⁺生成 Fe³⁺，Fe³⁺进一步与 4-氨基安替比林和酚反应生成红色醌类化合物，在 505 nm 处有特征吸收峰，通过测定 505 nm 处的吸光值来反映尿酸酶的活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96 孔板、超声破碎仪、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、EP 管、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为 1︰5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000 rpm，4℃，离心 10 min，取上清置于冰上待测。

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）: 提取液体积（mL）为 500~1000 : 1 的比例（建议 500 万个细菌或细胞加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，总时间 5 min）；然后 10000 rpm，4℃，离心 10 min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 505 nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、 将 1 mmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 0.5 μmol/mL 的标准溶液备用。标准溶液的稀释：取 20μL 1mmol/mL 过氧化氢标准液，加入 1980μL 蒸馏水，充分混匀，配制成 10μmol/mL 标准液，再取 50μL 1mmol/mL 过氧化氢标准液，加入 950μL 蒸馏水，充分混匀，配制成 0.5μmol/mL 标准液使用，现用现配。（实验中每管需要 30μL，为减小实验误差，故配制大体积）。

3、 操作表：(在 1.5 mL 离心管/96 孔板中)

注意事项：

1、 A 大于 1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算时乘以相应的稀释倍数。

2、 工作液 A 与工作液 B，需根据样本量现配现用，配后建议 2 小时内用完。工作液本身淡黄的，随着时间的延长，会由淡黄色变为橘红色、粉色、红色甚至酒红色，如有变色，则视为失效，需重新配置。

实验实例：

1、 取 0.1g 小鼠肝脏进行样本处理，取上清稀释 4 倍后按测定步骤操作，使用 96 孔板测定计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.804-0.285=0.519，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.741-0.051=0.690，按样本质量计算酶活得：尿酸酶酶活（U/g 质量）=ΔA÷ΔA 标准÷W×4（稀释倍数）= 0.519÷0.690÷0.1×4（稀释倍数）=30.09 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！