N-乙酰基-β-葡萄糖苷酶（NAG）活性检测试剂盒 可见分光光度法

N-乙酰-β-D -葡萄糖苷酶（NAG）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意:本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格: 50T/24S

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取一瓶加入 2.5 mL 蒸馏水溶解备用；可-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；

2、 标准品：5 μmol/mL 对硝基苯酚溶液。

产品说明：

N-乙酰-β-D -葡萄糖苷酶（EC 3.2.1.52，N-acetyl-β-D-glucosidase，NAG）广泛分布于各种组织中，是一种细胞内溶体酶，测定NAG活性可用于肾小管间质性肾炎、尿路感染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反应和肾病综合症的早期诊断。

NAG分解N-β-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最 大吸收峰，通过测定400nm下吸光度的变化来计算NAG活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、天平、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），冰浴匀浆。15000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、细菌、细胞：先收集细胞或细菌样本到离心管内，离心弃上清后，按照细胞数量 10⁴个：提取液体积（mL）500~1000:1 的比例，建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细胞（冰浴，功率 200w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min），然后 15000g，4℃，离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）等液体：直接测定。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液的稀释：取125μL 5 μmol/mL对硝基苯酚溶液，加入875μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.625 μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要50μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 操作表 (在1.5mL离心管中依次加入下列试剂) ：

三、NAG活性计算

注意事项：

吸光度若大于1.2时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。

实验实例：

1. 取 0.1g 大鼠脾脏组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。15000g，4℃离心 10min，取上清稀释 5 倍，按照测定步骤操作，测定计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.798-0.042=0.756，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.364-0.006=0.358，按样本质量计算得：

NAG（U/g 质量）=20.83×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W×5（稀释倍数）=2199.3687 U/g 质量。

2. 取 0.1g 玉兰，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。15000g，4℃离心 10min，取上清，按照测定步骤操作，测定计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.543-0.120=0.423，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.364-0.006=0.358，按样本质量计算得：

NAG（U/g 质量）=20.83×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=246.120 U/g 质量。

3. 取兔血清直接检测，按照测定步骤操作，测定计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.542-0.348=0.194，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.364-0.006=0.358，按液体体积计算得：

NAG（U/mL）=20.83×ΔA 测定÷ΔA 标准=11.2878 U/mL。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！