土壤β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(S-C1)活性检测试剂盒

土壤β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶（S-C1）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：甲苯自备。

2、 试剂二：临用前每瓶加入 7.5 mL 试剂三，充分溶解备用，用不完的试剂仍 2-8℃保存一周。

3、 标准品：5 mmol/L 的对硝基苯酚溶液。

产品说明：

β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(C1，EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，C1酶作用于纤维素线状分子的末端，水解β-葡萄糖苷键，每次切下 1个纤维二糖分子。

S-C1能够催化对硝基苯纤维二糖苷(PNPC)生成对-硝基苯酚，后者在400nm有特征光吸收。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰、30-50目筛、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30-50 目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至400nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、 标准品稀释：临用前取20μL 5 mmol/L的对硝基苯酚溶液，加入980μL试剂三，充分混匀，配制成100 μmol/L标准液使用，现用现配。（实验中每管需要100μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 加样表：

三、S-C1 活力计算

注意事项：

当吸光值大于1.5时，建议将上清液用试剂三稀释后测定或者减少土样质量测定。计算时同步修改计算公式。

实验实例：

1、 取两管 0.03g 土样，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A 测定管、A 对照管。用 96 孔板测得计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.444-0.244=0.2，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.413-0.048=0.365，计算酶活得：

S-C1 活力（U/g 土样）=0.684× ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=0.684×0.2÷0.365÷0.03=12.493 U/g 土样。

2、 取两管 0.03g 林土样，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，记为 A 测定管、A 对照管。用 96 孔板测得计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.33-0.195=0.135，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.413-0.048=0.365，计算酶活得：

S-C1 活力（U/g 土样）=0.684×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=0.684×0.1135÷0.365÷0.03=8.4329 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！