果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)检测试剂盒 微量法

果糖-1,6-二磷酸（酯）酶（FBP）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格:100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入 20 mL 试剂四充分溶解待用，用不完的试剂于 4℃保存。

2. 试剂二：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 1.1 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

3. 试剂三：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 1.1 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融。

产品说明：

果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP）又称果糖-1,6-二磷酸酯酶，其在糖异生过程和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。催化1,6-二磷酸果糖和水生成6-磷酸果糖和无机磷。

FBP催化1,6-二磷酸果糖和水，生成6-磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，测定340nm下NADPH的增加速率，即可计算FBP活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、天平、低温离心机、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。于 4℃，8000g，离心 10min，取上清，置冰上待测。

细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min），于 4℃，8000g，离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂一37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10min。

3、 操作表：(在微量石英比色皿/96孔UV板中依次加入下列试剂)

在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中分别加入上述试剂，充分混匀后于 340nm 处测定 10s 时的吸光值 A1，迅速置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴或培养箱 5min（酶标仪有控温功能可直接调节温度），拿出迅速擦干测定 310s 时的吸光值 A2，计算 ΔA 测定管=A2 测定-A1 测定，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白，ΔA=ΔA 测定管-ΔA空白管。（空白管只需做 1-2 次）

三、FBP 酶活性计算

注意事项：

1、 当ΔA大于0.6时，建议将样本稀释后再进行测量。

2、 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.02。

实验实例：

1、 取 0.1g 胰脏组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA测定管=A2 测定-A1 测定=0.1957-0.1655=0.0302，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白=0.0779-0.065=0.0129，ΔA=ΔA测定管-ΔA 空白管=0.0302-0.0129=0.0173，按样本质量计算酶活得：

FBP（U/g 质量）=321.5×ΔA÷W=321.5×0.0173÷0.1=55.6195 U/g 质量。

2、 取 0.1g 黑麦草加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA测定管=A2 测定-A1 测定=0.7224-0.6267=0.0957，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白=0.0779-0.065=0.0129，ΔA=ΔA测定管-ΔA 空白管=0.0957-0.0129=0.0828，按样本质量计算酶活得：

FBP（U/g 质量）=321.5×ΔA÷W=321.5×0.0828÷0.1=266.202 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！