中性木聚糖酶活性检测试剂盒微量法 微量法

中性木聚糖酶（NEX）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

标准品：10mg木糖。临用前加入667μL蒸馏水配成100μmol/mL的标准品溶液，再用水稀释25倍得到4μmol/mL的木糖标准液，备用。

产品说明：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，中性木聚糖酶（NEX）一般分离自最适生长 pH 为 6-8 的微生物。

NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm吸光值增加速率，可计算 NEX 活力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细胞或微生物样本发酵液的制备：发酵液于 8000rpm，4℃，离心 15min，取上清，置于冰上待测。

2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。

3、酶干粉：称约 1mg，加缓冲液 1mL，震荡充分溶解。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 将上清液/酶溶液用蒸馏水稀释十倍后置冰上待测。

3、 样本测定：

三、NEX计算公式

注意事项：

吸光度变化应该控制在 0.01~1.5 之间，否则加大样本量或稀释样本，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变；也可以延长或者缩短反应时间。

实验实例：

1、 取 0.1g 柳树叶加入 1mL 缓冲液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释十倍后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.592-0.408=0.184，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=1.009-0.173=0.836，按样本质量计算酶活得：

NEX 活力（U/g 质量）=1.33×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=1.33×0.184÷0.836÷0.1=2.927 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！