细胞壁结合酸性转化酶活性检测试剂盒 可见分光光度法

细胞壁结合酸性转化酶（CWI）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格:50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 25 mL 试剂一，充分溶解后待用；

2、 标准品：10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水充分溶解，配成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用，4℃保存一周。

产品说明：

蔗糖转化酶（Invertase，Inv）不可逆的催化蔗糖裂解形成葡萄糖和果糖，在植物蔗糖代谢中发挥着重要作用。Inv根据最适 pH，可分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI），其中 AI 根据亚细胞定位的差异又可分为可溶性酸性转化酶（Soluble acid Invertase，SAI）和细胞壁结合酸性转化酶（Cell wall-bound acid Invertase，CWI）。

CWI 以离子键的形式结合在细胞壁上，在“库”组织韧皮部蔗糖卸载、蔗糖质外运输、植物的生长发育以及抵抗各种胁迫中起着重要作用。

CWI 催化蔗糖降解产生还原糖，还原糖与 3,5 –二硝基水杨酸反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定 540nm 处吸光值变化可计算得 CWI 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）: 提取液一体积（mL）为 1 : 5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液一）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，12000g，离心 10min，弃上清，留沉淀；沉淀中加入 1mL 蒸馏水，充分震荡混匀，4℃，12000g，离心 10min，弃上清，留沉淀；沉淀中加入 1mL 提取液二，充分混匀，4℃浸提 15 h，4℃，12000g，离心 10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、 将 10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3mg/mL 的标准溶液备用。

3、 操作表 (在 2mL 离心管中操作) ：

三、CWI活性计算

注意事项：

1. 当 A 或 ΔA 超过 1 时，建议将样本用提取液二稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。

2. 95℃水浴时 EP 管盖紧，防止水分散失，待冷却至室温后（建议每次实验后冷却时间保持一致），再进行下一步操作，避免液体飞溅烫伤以及影响试验数据。

实验实例：

1. 取 0.1g 丁香叶加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，最 后取上清后按照操作步骤操作，测 A 对照管=0.566，A 测定管=0.903，标准曲线 y=1.315x-0.2723，A 空白管=0.058，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.903-0.566=0.337，x=（0.337+0.2723）÷1.315=0.463，按样本质量计算酶活得：

CWI 酶活（U/g 质量）= 33.33x÷W= 33.33×0.463÷0.1=154.433 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！