土壤脂肪酶（S-LPS）活性检测试剂盒 微量法

土壤脂肪酶（S-LPS）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格: 100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 标准品：临用前加入 1.97 mL 甲苯，即 100 μmol/mL 油酸。用前注意解冻溶解。用不完的试剂可以 2-8℃保存一个月。

2、 工作液的配制：将试剂三临用前加入 16 mL 蒸馏水于沸水浴中溶解，2-8℃保存两周。冷却至常温后加入

4 mL 试剂二混合，高速震荡 2 次，每次 3min，间隔 5min。可根据该比例现用现配。

产品说明：

脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。该酶在土壤生物动力学中具有重要的作用。

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔UV板（非聚苯乙烯材质）、台式离心机、震荡混匀器、恒温水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯（不可快递）、冰和蒸馏水、30-50目筛。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干，过30-50目筛。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至710nm，分光光度计用甲苯调零。

2、 标准溶液的稀释：取50μL 100μmol/mL油酸标准溶液，加入950μL甲苯，充分混匀，配制成5μmol/mL标准溶液待测，现用现配。（实验中每管需要300μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 操作表：取1.5mL EP管，加入下列试剂

三、S-LPS 活性计算

注意事项：

1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、实验过程中须远离火源。

3、当吸光度大于 0.8 时，建议将样本稀释后测量（第二次加入甲苯的量增加）。

4、甲苯可溶解聚苯乙烯/聚丙烯材质。

实验实例：

1、 取两管 0.03g 三叶草土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用 96 孔 UV 板测定吸光值，记为 A 测定管、A 对照管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.145-0.093=0.052，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.432-0.061=0.371，计算酶活得：S-LPS (U/g 土样) =43.2×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=43.2×0.052÷0.371÷0.03=201.83 U/g 土样。

2、 取两管 0.03g 林土，即为测定管和对照管，按照测定步骤操作，用 96 孔 UV 板测定吸光值，记为 A 测定管、A 对照管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.124-0.08=0.044，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.432-0.061=0.371，计算酶活得：S-LPS (U/g 土样) =43.2×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W=43.2×0.044÷0.371÷0.03=170.78 U/g 土样。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！