糜蛋白酶活性检测试剂盒 微量法

糜蛋白酶活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前溶于 1.6 mL 甲醇中，再用水定容至 10 mL。可分装后-20℃保存，避免反复冻融。

产品说明：

糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。

糜蛋白酶催化 BTEE 水解，产物在 256nm 有特征光吸收；通过测定 256nm 光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清即粗酶液。

2. 血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至256nm，蒸馏水调零。

2、 试剂一置于25℃水浴中保温30min。

3、 样本测定：

将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板后充分混匀，于 256nm 处测定初始吸光值 A1 和 3min 时的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。

三、糜蛋白酶活性计算公式

注意事项：

1. 当 ΔA 大于 0.15 或者吸光值大于 1 时，建议将样本用提取液稀释后测定，注意计算公式中乘以稀释倍数。

2. 当 ΔA 小于 0.04 时，建议将样本浓缩或者增加样本体积进行测定，注意计算公式除以浓缩倍数或者改变体积。

实验实例：

1、 取 0.1g 兔肾脏加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清后再用提取液稀释 10 倍，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=0.9955-0.9192=0.0763，按样本质量计算酶活得：糜蛋白酶活(U/g 质量)=3.8×ΔA÷W×10（稀释倍数）=28.994 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！