酸性转化酶(AI)活性检测试剂盒 可见分光光度法

酸性转化酶（AI）活性检测试剂盒说明书

 可见分光光度法

规格: 50T/24S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、试剂二：临用前加入 30mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存；

2、标准品：10mg 葡萄糖，临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，制备 10mg/mL 葡萄糖标准液备用。

产品说明：

蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，将高等植物 Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。AI(EC 3.2.1.26)主要存在于细胞液泡或自由空间中，最适 pH 为 4.5~5.0（酸性），通过降解液泡中蔗糖，调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。

AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 AI 活性成正比。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤：

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释成1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0mg/mL葡萄糖标准液。

3、 操作表：（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）

三、AI 活性计算

注意事项：

1、如果加入试剂三，煮沸10min后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度；

2、如果吸光值大于1，可以用蒸馏水将样本稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）。

3、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

实验实例：

1、 取 0.1g 黄花芯加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定=0.918，ΔA对照=0.752，ΔA=A 测定-A 对照=0.918-0.752=0.166，带入标准曲线 y=1.3885x-0.1929，计算 x=（0.166+0.1929）/1.3885=0.25848，按样本质量计算酶活得：

AI 活性（U/g 质量）＝33.3×x÷W＝33.3×0.25848÷0.1=86.074 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！