山梨醇脱氢酶活性检测试剂盒 微量法

山梨醇脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：取 3.4 mL 试剂五加入 1 瓶试剂一粉剂中溶解，再加入一支试剂四，现用现配，24 h 变质；

2、 标准品：临用前加入 1.4 mL 蒸馏水，即 10 μmol/mL NADH 标准品。-20℃保存 4 周，避免反复冻融。

产品说明：

SDH（EC 1.1.1.14）催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。SDH 催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原 NAD⁺生成 NADH，生成的 NADH 能将电子传递给 NBT 生成紫色的甲臜，根据这一原理可以计算 SDH 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪，可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000×g 4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000 ×g 4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 570 nm，可见分光光度计蒸馏水调零。

2、标准管的测定：将 10 μmol/mL NADH 标准品用水稀释至 1.5、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3 μmol/mL的标准溶液

(1) 标准品稀释表

（2）标准品测定表

3、样本的测定：

三、SDH 活性计算

注意事项：

1.ΔA 大于 0.7 时，建议将样本用提取液稀释后测量，计算公式中乘以稀释倍数。

2.测定过程中样本和工作液在冰上放置，以免变性和失活。

3.比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃，取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水，将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！