β-木糖苷酶活性检测试剂盒 微量法

β-木糖苷酶活性检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前取 1 支加入 0.555 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂建议-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融（1 支粉剂溶解后可做 48S，为了延长使用时间，此产品多给 1 支粉剂）；

2. 标准品：5μmol/mL 对硝基苯酚溶液。

产品说明：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰，测定 405nm光吸收增加速率，可计算 β-木糖苷酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、水浴锅、蒸馏水、超声破碎仪。

操作步骤：

一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、植物样本：称取约 0.1g 样本，加 1mL 提取液充分冰浴匀浆，然后 12000rpm，4℃，离心 20min，弃沉淀，取 20μL上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。

2、 细菌、真菌样本：收集约 500 万个细胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率 200w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，弃沉淀 ，取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至405nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：用试剂二将标准液稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL，稀释可参考下表。

3、 样本测定：

三、β-木糖苷酶活性计算

注意事项：

1、 吸光度变化应该控制在 0.05~0.6 之间。否则加大样本量或稀释样本，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

2、 样本蛋白质含量需要另外测定。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！