肉桂醇脱氢酶（CAD）活性检测试剂盒 紫外分光光度法

肉桂醇脱氢酶（CAD）活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 提取液：内含不溶物，使用前摇匀。

2、 试剂一：临用前加入 15 mL 试剂三溶解。可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。

3、 试剂二：液体置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入 15 mL 乙醇充分混匀，配好后 4℃保存。

4、 工作液的配制：将试剂一、试剂二、试剂三按 1:1:2（V:V:V）的比例配制工作液，工作液用现配。

产品说明：

CAD 是木质素生物合成途径中的关键酶之一，催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成与之相应的肉桂醇。该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP⁺，在340nm下测定NADPH消耗速率，即可反映CAD活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g 4℃离心 10min，取上清，置上待测。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：

三、CAD酶活计算

注意事项：

1、当A1小于0.8，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。

2、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.04。

实验实例：

1. 取约0.1g三叶草叶，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清，按照测定步骤操作，测定计算ΔA测定管= A1测定-A2测定=1.532-1.462=0.07，ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.012-1.007=0.005，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.07-0.005=0.065，按样本质量计算得：

CAD酶活（U/g 质量）=321.54×ΔA÷W=209.001 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！