游离脂肪酸(FFA)含量检测试剂盒 微量法

游离脂肪酸（FFA）含量检测试剂盒说明书

 微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：实验前一天，取一个玻璃瓶，按照正庚烷：无水甲醇：氯仿=24:1:25 的比例配置（自备），盖紧后混匀；

2、 试剂三：临用前每瓶加入 13 mL 无水乙醇充分溶解，4℃可保存一周；

3、 标准品：临用前把试剂转移到 10 mL 玻璃瓶中，加入 7.8 mL 氯仿充分溶解，即为 5μmol/mL 的棕榈酸标准溶液，4℃保存。

产品说明：

FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。血清中FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关。

FFA与铜离子结合形成脂肪酸铜盐，并溶于氯仿；利用铜试剂法测定铜离子含量，即可推算出游离脂肪酸含量。

技术指标：

检出限：0.0390 μmol/mL

线性范围：0.05-2 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

 研钵/匀浆器、冰、台式离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、一个 50mL玻璃瓶、一个 10mL 玻璃瓶、正庚烷、无水甲醇、氯仿（三氯甲烷）、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、血清中 FFA 测定：将所取血液，室温静置 1 h 后，于 4 ℃ 离心机 3500 rpm 离心 15min，取上层血清置于4℃冰箱保存，待测。

2、组织中 FFA 含量测定：组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，称取约 0.1g，加入 1 mL 提取液，匀浆后，8000rpm，4℃离心 10min，取上清液，置冰上待测。

二、操作步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 550 nm，无水乙醇调零。

2. 试剂二在 37℃水浴中预热 30 min 以上。

3. 标准品的稀释：将标准品用氯仿稀释成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL。

4. 按下表在 1.5mL 离心管中加入相应试剂

三、FFA 含量计算

1、标准曲线的绘制：以标准溶液的浓度为x轴，以ΔA标准（ΔA=A标准管-A空白管）为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将ΔA（ΔA=A测定管-A对照管）带入方程得到x。

2、血清FFA含量：

FFA含量（μmol/L）=1000x

3、组织FFA含量：

(1) 按样本蛋白浓度计算

FFA含量（μmol/mg prot）=x×V样总÷（Cpr×V样总）=x÷Cpr

(2) 按样本质量计算

FFA含量（μmol/g 质量）=x×V样总÷W

V样总：上清液总体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000：单位换算系数，1L=1000mL。

注意事项：

1. 试剂三配制应尽量晚配，可在操作到加入试剂二时，再配制试剂三。

2. 必须保证每管的震荡频率及时间一致。

3. 尽量在 30min 内完成测量。

4. 上层溶液不可以直接加入到 96 孔板内，并且测完后要密封好再丢弃。

5. 因所用试剂多数为有机溶剂，同一支吸头多次吸取会造成体积不准确，建议更换吸头。

实验实例：

1、 取小鼠血清进行样本处理，按照测定步骤操作，使用 96 孔板测得 A 对照管=0.098、A 测定管=0.308、ΔA=A测定管-A 对照管=0.308-0.098=0.21，带入标准曲线 y =0.6679x+0.019，计算 x=0.286，按血清含量计算：

FFA 含量（μmol/L）=1000x=1000×0.286=286 μmol/L。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！