草酸含量检测试剂盒 可见分光光度法

草酸含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格: 50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入 4mL 蒸馏水溶解后待用；

2、 标准品：临用前加入 792μL 蒸馏水配制成 100 μmol/mL 草酸标准溶液；

产品说明：

草酸是一种二元羧酸，广泛存在于植物界中，且在不同领域有着不同的作用：在医药、印染、塑料等工业生产中，草酸可用作制药原料、络合剂、漂白剂、沉淀剂以及还原剂等；从食品角度看，长期食用草酸含量高的蔬菜，容易引发关节炎、低血钙、膀胱结石和肾结石等疾病，而被认为是矿物元素的拮抗物。

Fe³⁺在 pH 为 2 的条件下可以与磺基水杨酸生成紫色络合物，在 510 nm 处有特征吸收峰。草酸及草酸根可以

使 Fe³⁺与磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅，且 Fe³⁺与磺基水杨酸络合物的吸光度随着草酸量的增加而降低，据此可由降低的吸光值计算出样本中草酸的含量。

技术指标：

最 低检出限：0.0982 μmol/mL

线性范围：0.75-25 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1 mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：蒸馏水体积（mL）为 1:5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 蒸馏水）充分匀浆，然后加入少许试剂四（约 3-5mg），震荡混匀后置于 75℃水浴锅脱色 30 min，期间摇晃 2-3 次，脱色后常温 3000r/min 离心 15 min，取上清置于冰上待测（若组织沉淀与试剂四不能离心去除时，建议将上清多离心几次；

若一次脱色不完全时，建议重复脱色至溶液呈无色或略呈乳白色）。

二、测定步驟

1、 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 510 nm，蒸馏水调零。

2、 将 100 μmol/mL 的草酸标准液用蒸馏水稀释为 25、20、15、12、6、3、1.5、0.75μmol/mL 的标准溶液备用。

3、 操作表 (在 1.5 mL 离心管中操作) ：

注意：如果检测样本量大，可以根据样本所需按照试剂一:试剂二:试剂三=2:15:1（v:v:v）的比例配制成工作

液现配现用，加样体系为 450 μL 工作液，50 μL 样本（蒸馏水或标准溶液），500 μL 蒸馏水。

三、草酸含量计算

1、 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y= kx+b，将 ΔA 带入方程得到 x（μmol/mL）。

2、 草酸含量的计算：

草酸含量（mg/g 质量）= x×V 提取×M×10-3÷W=0.09x÷W

V 提取：加入的蒸馏水体积，1mL；W：样本质量，g；M：草酸分子质量 90.04；10-3：单位换算系数，1μg=10-3 mg。

注意事项：

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2. 如将试剂一、试剂二与试剂三配成工作液使用时，按照配制比例根据样本量所需现配现用，不得一次性配完待用。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！