脂肪酸合成酶(FAS)活性检测试剂盒 微量法

脂肪酸合成酶（FAS）活性检测试剂盒说明书

 微量法

规格：100T/96S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前取一支加入 1 mL 试剂三，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，可以保存 2 周，禁止反复冻融。

2、 试剂二：临用前取一支加入 1 mL 试剂三，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，可以保存 2 周，禁止反复冻融。

3、 试剂四：临用前取一支加入 0.5 mL 试剂三，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，可以保存 2 周，禁止反复冻融。

产品说明：

脂肪酸合成酶（Fatty acid synthetase，FAS）是一种关于脂肪酸再生能力并起重要作用的限速酶，它通过催化丙二酰辅酶Ａ、乙酰辅酶 A 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP⁺，NADPH 在 340nm 条件下有特征吸收峰。通过检测 340nm 条件下吸光值的下降速率，可以计算出 FAS 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅/培养箱、超声波细胞破碎仪、低温离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞样本的制备：按照细胞数量（10⁴个）: 提取液体积（mL）为 500~1000 : 1 的比例（建议 500

万细胞加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300W，超声 3 秒，间隔 9 秒，总时间 5 min）；于 4℃，12000g 离心 20 min，取上清液，置于冰上待测。

2、组织样本的制备：按照质量（g）: 提取液一体积(mL)为 1: 5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，12000 g 离心 20 min，取上清液，置于冰上待测。

3、血清（浆）等液体样本：直接测定

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 340 nm，蒸馏水调零。

2、 试剂三临用前置于 37℃（哺乳动物）或者 25℃（其他物种）保温 15min。

3、 加样表（在 96 孔 UV 板或者微量石英比色皿中加入下列试剂）

空白管只需测定 1-2 次，如果样本数量过多也可以将试剂一到试剂四按上述比例混匀配制成工作液进行测定。

三、FAS 活性计算

注意事项：

1、提取液中含有 BSA（约 2mg/mL），测定上清液蛋白浓度时需要减去提取液中蛋白浓度。

2、如果测定吸光值＞1.5 或 ΔA＞0.5，建议用蒸馏水稀释样本后再进行测定，计算公式中乘稀释倍数。如果测定吸光值较小，建议加大样本量后再进行测定。

实验实例：

1、 取 0.1 g 小鼠肝脏加入 1 mL 提取液进行冰浴匀浆。12000 g 4℃离心 20 min，取上清置冰上，之后用石英微量比色皿按照测定步骤操作，测得计算 ΔA =（A1 测定-A2 测定）-（A1 空白-A2 空白）= （1.1783-1.0945）-

（0.5653-0.5593）=0.0778，按样本质量计算酶活得：

FAS(U/g 质量) =1607.7×ΔA ÷W=1251 U/g 质量。

2、 取 0.1 g 绿萝叶片加入 1 mL 提取液进行冰浴匀浆。12000 g 4℃离心 20 min，取上清置冰上，之后用石英微量比色皿按照测定步骤操作，测得计算 ΔA =（A1 测定-A2 测定）-（A1 空白-A2 空白）= （0.8487-0.8413）-

（0.5653-0.5593）=0.0014，按样本质量计算酶活得：

FAS(U/g 质量) = =1607.7×ΔA ÷W=22.5U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！