脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒微量法

脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1．试剂一：自备冰乙酸。

2．标准品：脯氨酸 10 mg，临用前加入 1 mL 蒸馏水，配成 10 mg/mL 标准品。

产品说明：

脯氨酸（Pro）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内 Pro 含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

用磺基水杨酸（SA）提取 Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色，在 520nm 测定吸光度。

技术指标：

最 低检出限：0.2876 μg/mL

线性范围：0.5-40 μg/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细胞、细菌或组织样本的制备：

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），之后置沸水浴振荡提取 10min；10000g，常温离心 10min，取上清，冷却后待测。

组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取 10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

2、血清（浆）样本：取 0.1mL 血清（浆）加入 0.9mL 提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取 10 分钟，10000g，常温离心 10 分钟，取上清，冷却后待测。

二、 测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 520nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、 标准品的处理：将标准品用蒸馏水稀释为 40、20、10、8、4、2、1、0.5μg/mL。

3、 操作表：

三、Pro 含量计算

1、 以标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b，将ΔA代入方程得到x

（μg/mL）。

2、 按照细菌、细胞数量计算

细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/10⁴ cell)=x×V 提÷细胞/细菌数量= x÷细胞/细菌数量

3、 按照组织质量计算

Pro 含量(μg/g 质量) =x×V 提÷W=x÷W

4、 按照血清（浆）体积计算

Pro 含量（μg/mL）=10×x

V 提：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；细胞/细菌数量：以 10⁴为单位，万个；10：血清稀释倍数，

（0.1+0.9）÷0.1=10。

注意事项：

1. 提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。

2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！