酪氨酸解氨酶（TAL）活性检测试剂盒 微量法

酪氨酸解氨酶（TAL）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

试剂二：临用前取 1 瓶加入 2.8 mL 蒸馏水和 11 μL 浓 HCl 充分溶解待用。现配现用。2-8℃保存 4 周。

产品说明：

酪氨酸解氨酶（TAL）广泛存在于植物和微生物中，是苯丙氨酸次生代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪氨酸转化为香豆酸，香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。

TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸，其在310nm下有吸收峰，根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、冰、浓盐酸和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。12000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至310nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。

2、 加样表（在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入）

将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96 孔 UV 板后迅速吹打混匀，记录第 10s 的吸光值 A1，迅速置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）水浴或培养箱中 3min，拿出迅速擦干测定 3min10s 时的吸光值 A2，计算ΔA=A2-A1。

三、TAL 酶活计算

注意事项：

当ΔA大于0.2或者A1大于1.5时，建议将样本用蒸馏水稀释后测量；ΔA过小时，建议增加酶促反应时间（5min或10min）或增加加入的样本体积来测定。（计算时注意同步修改计算公式）

实验实例：

1. 取 0.1g 木槿叶加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清稀释 3 倍后按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿

测得计算ΔA=A2-A1=0.4813-0.4689=0.0124，按样本质量计算酶活得：

TAL（U/g 质量）=333×ΔA÷W×F（稀释倍数）=333×0.0124÷0.1×3=123.876 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！