γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测试剂盒 微量法

γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格: 100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 工作液（在试剂一瓶中配制）：临用前配制，把试剂二倒入试剂一瓶中，充分溶解（室温过低时可以 40℃水浴促进溶解）；然后把试剂三倒入试剂一瓶中，混匀后室温保存。

产品说明：

γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。

γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约 0.1g 样本，加提取液 1.0 mL 充分研磨，于 4℃，10000rpm 离心 15min，取上清液待测。

3、血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。

2、 工作液置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min以上（保证无沉淀）。

3、 样本测定：

三、γ-GT活性计算

注意事项：

培养细胞中γ-GT活性测定时，细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。

实验实例：

1、 取 0.1g 肾脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，于 4℃，10000rpm 离心 15min，取上清液稀释 4 倍按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA 测定管=A 测 2-A 测 1=2.088-0.638=1.45，ΔA 空白管=A 空 2-A 空 1=0.435-0.425=0.01，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=1.45-0.01=1.44，按样本质量计算酶活得：

γ-GT（U/g 质量）=0.845×ΔA÷W×4（稀释倍数）=48.67 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！