酮体含量检测试剂盒（血清、血浆、尿液等）微量法

酮体含量检测试剂盒（血清、血浆、尿液等）说明书

微量法

规格：100T/96S

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二 A 液：临用前取一支加入 600μL 蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存 3 周。避免反复冻融。

2、 试剂二 B 液：临用前取一支加入 300μL 蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存 3 周。避免反复冻融。

3、 试剂三：临用前取一支加入 400μL 蒸馏水（100T/96S），充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存 3 周。避免反复冻融。

4、 标准品 1：8mg 3-羟基丁酸钠。临用前加入 0.98mL 蒸馏水，充分溶解，即 8mg/mL 3-羟基丁酸钠标准溶液，4℃可以保存 4 周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成 0.2mg/mL 标准溶液待用，即为标准溶液 1。

5、 标准品 2：8mg 乙酰乙酸锂。临用前加入 0.95mL 蒸馏水，充分溶解，即 8mg/mL 乙酰乙酸锂标准溶液，-20℃可以保存 4 周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成 0.05mg/mL 标准溶液待用，即标准溶液 2。

6、 BOH工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一A液、试剂二A液 、试剂三按照850μL:40μL:10μL（共900μL，5T 的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于 37℃保温 15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在 4h 内用完。

7、 AcAc 工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一 B 液、试剂二 B 液、试剂三按照 870μL:20μL:10μL（共900μL，5T 的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于 37℃保温 15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在 4h 内用完。

产品说明：

酮体是肝脏脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸（AcAc）、β-羟丁酸（BOH）及丙酮三者统称。酮体中丙酮的生成量相当小，生成后即被吸收。乙酰乙酸和 β-羟丁酸则经血流进入肝外组织，在那里被氧化，经柠檬酸循环提供更多能量给那些组织使用，例如骨、心肌和肾皮质。

在 pH 7.0 和 37℃条件下，BOH 在 β-羟丁酸脱氢酶（HBDH）催化下脱氢生成乙酞乙酸，同时 NAD⁺被还原成NADH；在 pH 8.8 和 37℃条件下，AcAc 被 HBDH 还原为 3-羟基丁酸酯或脱羧生成丙酮，同时 NADH 被氧化成NAD⁺，NADH 在 340nm 波长下有特征吸收峰，通过检测在 340nm 波长下的吸光值变化可以计算出 BOH 和 AcAc的含量，从而计算出样本中酮体的含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

血清（浆）、尿液等液体样本：直接测定。（若有浑浊可以离心取上清后测定）

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，用蒸馏水调零。

2、 BOH 含量测定：

3、 AcAc 含量测定：

三、酮体含量计算

注意事项：

1. 如果测定初始吸光值＞1.5 或 ΔA＞0.2，建议将样本用蒸馏水稀释后再测定。计算公式中乘上稀释倍数；

2. 如果 ΔA 接近空白值，建议加大样本量，同时保证反应体系总体积不变，相应减少工作液加样量后测定。例如，若增大样本量为 40μL，则工作液调整为 160μL。标准管与样本管加样体系应保持一致，计算公式不变。

实验实例：

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！