总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒 微量法

总抗氧化能力（T-AOC）检测试剂盒说明书

 微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 提取液：使用前置于 2-8℃冰箱或冰上预冷；

2、 标准品：10 mg FeSO₄·7H₂O。临用前加入 0.9 mL 蒸馏水，20μL 浓硫酸，配制成 40 μmol/mL FeSO₄标准

溶液备用；

3、 混合液：将试剂一、试剂二、试剂三按 7:1:1 的比例混合，现配现用，用多少配多少。使用前置于 37℃水浴锅或 37℃恒温培养箱中预热 10min。

产品说明：

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

技术指标：

最 低检出限：0.000567243 μmol/mL

线性范围：0.00078125-0.1 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、恒温水浴锅、低温离心机、细胞超声破碎仪、研钵/匀浆器、浓硫酸、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、血清、血浆、唾液或尿液样本

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）5000r/min 离心 10min，取上清待测。

血清、唾液或尿液样本直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过 30d）后再测定。

2、细胞或细菌样本

收集细胞或细菌于离心管中。按照细胞或细菌数量（104）：提取液体积（mL）为 500~1000:1 的比例，加入 1.0mL预冷的提取液（建议取 500 万细胞，加入 1mL 预冷的提取液），超声破碎细胞（功率 200W，超声开 3s，关 9s，总时间 3min），然后 10000rpm，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

3、组织样本

按照组织质量（g）︰提取液体积（mL）为 1︰5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 预冷的提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000rpm，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 593nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、标准溶液的制备：将 40 μmol/mL 标准溶液用蒸馏水稀释为 0.15、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156μmol/mL 标准溶液备用。

3、标准液稀释可参考下表：

备注：实验中每个标准管需 100μL 标准溶液。

4、吸取 100μL 标准溶液（蒸馏水作空白）加入 100μL 试剂二，充分混匀，反应 10min，测定 593nm 下的吸光度，计算 ΔA 标准=A 标准-A 空白，此时 Fe2+终浓度为 0.075、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156、0.00078μmol/mL，标准曲线只需做 1-2 次。

5、操作表

三、总抗氧化能力计算公式

注意事项：

1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的样本，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3. 样本中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

4. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

实验实例：

1. 取 0.1g 三叶草叶片加入 1mL 预冷的提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA测定=A 测定-A 空白=0.490-0.139=0.351，带入标曲 y=14.039x-0.0029，得出 x=0.025，按样本质量计算得：

总抗氧化能力（μmol/g 质量）=34×x÷W=34×0.025÷0.1=8.5 μmol/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！