鸟氨酸转氨酶活性检测试剂盒 微量法

鸟氨酸转氨酶（δ-OAT）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格: 100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加 5 mL 试剂一，充分溶解；用不完的试剂 4℃保存；

2、 试剂三：临用前加 5 mL 试剂一，充分溶解；用不完的试剂 4℃保存；

3、 试剂四：每瓶临用前加 10 mL 试剂一，充分溶解，-20℃分装保存；-20℃保存一周。

产品说明：

鸟氨酸转氨酶是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸的关键酶之一，对植物适应逆境胁迫起重要作用。鸟氨酸和 α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和 NADH 的作用下，可发生酰基转移反应，生成 NAD 和吡咯醛-5-羧酸（P5C），NADH在 340 nm 处有特殊吸收峰，通过检测在 340 nm 处吸光度的变化值，可计算出鸟氨酸转氨酶性高低。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织样本：按质量（g）：提取液体积（mL）1：5~10 比例（建议称取 0.1 g 样本，加入 1.0 mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于 4℃，12000 rpm，离心 10 min，取上清液置于冰上待测；

2、细胞样本：按细胞数量（104）：提取液体积（mL）500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1.0 mL 提取液）加入提取液，冰浴超声破碎细胞（功率 300 W，超声 3 s，间隔 7 s，总时间 3 min）；然后于 4℃，12000rpm，离心 10 min，取上清液置于冰上待测；

3、液体样本：直接测定。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 340 nm，蒸馏水调零。

2、 将配好的试剂二、三、四置于 37℃预热 10 min。（用多少，预热多少）

3、 操作表：（在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中操作）

 在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中分别加入上述试剂，充分混匀后于 340 nm 处测定 10 s 时的吸光值 A1，迅速 置于 37℃水浴锅或培养箱 10 min（酶标仪有控温功能可将温度调至 37℃或 25℃），拿出迅速擦干测定 10 min10 s 时的吸光值 A2，计算 ΔA 测定管=A1 测定-A2 测定，ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管。 空白管只需做 1-2 次。 

注意：加入样本时开始计时。

三、δ-OAT 酶活含量的计算

注意事项：

1. ΔA 高于 0.5 时，建议将样本稀释后检测，并在计算公式中乘以稀释倍数。若 ΔA 过小时，可以加大样本量或者延长酶促反应时间。

2. 将试剂依次加入后应尽量快速混匀并测定 OD 值，减少误差时间。

3. ΔA 空白管一般不会超过 0.05。

实验实例：

1、取 0.1g 红豆芽，进行样本处理，按照操作步骤进行测定（微量石英比色皿检测），计算得：ΔA 测定管=A2 测定-A1 测定=0.1058，ΔA 空白管=A2 空白-A1 空白=0，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.1058，按照样本质量计算酶活得：

δ-OAT（U/g 质量）=160.77×ΔA÷W÷d=160.77×0.1058÷0.1÷1=170.09 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！