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  • 抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒 微量法
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抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒 微量法

供货周期: 一周
品牌: 博尔森
规格: 100T/96S
货号: BES-2262BTK
CAS号:
报价: ¥1300
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产品介绍

抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒说明书

微量法

注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。

规格:100T/96S

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

2022060710332694928

溶液的配制:

1、 试剂二:临用前加 10 mL 蒸馏水充分溶解。4℃可以保存 1 周。(由于试剂稳定性较差,故多给一瓶)

2、 试剂三:临用前根据样本量取适量试剂三用蒸馏水稀释 100 倍使用即可。

产品说明:

 APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX 具有多种同功酶,分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体,以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化 H2O2氧化 AsA,是植物 AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影响到 AsA 的含量,APX 与 AsA 具有一定的负相关性。 APX 催化 H2O2氧化 AsA,通过测定 AsA 氧化速率,来计算得 APX 活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

 紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、低温离心机、移液枪、水浴锅、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 290nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂一在 25℃中预热 30min 以上。

3. 空白管:依次在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中加入 20μL 蒸馏水、140μL 预热的试剂一、20μL 试剂二和 20μL试剂三,迅速混匀后在 290nm 测定 10s 和 130s 的吸光度 A1 和 A2,ΔA 空白管=A1-A2。

4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中加入 20μL 上清液、140μL 预热的试剂一、20μL 试剂二和 20μL试剂三,迅速混匀后在 290nm 测定 10s 和 130s 的吸光度 A3 和 A4,ΔA 测定管=A3-A4。

三、APX 活性计算

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。

APX(U/mg prot) = (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106÷(Cpr×V 样)÷T

=1.79×(ΔA 测定管-ΔA 空白管) ÷Cpr

(2)按样本质量计算

活性单位定义:每克样本每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。

APX(U/g 质量) = (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106÷(V 样÷V 样总×W)÷T

=1.79×(ΔA 测定管-ΔA 空白管) ÷W

 ε:AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4L;106:单位换算系数,1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;W:样本质量,g;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02mL;V 样总:加入试剂一体积,1mL;T:催化反应时间,2min。

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

(1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。

APX(U/mg prot) = (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106÷(Cpr×V 样)÷T=3×(ΔA 测定管-ΔA 空白管) ÷Cpr

(2)按样本质量计算

活性单位定义:每克样本每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。

APX(U/g 质量) = (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106÷(V 样÷V 样总×W)÷T

=3×(ΔA 测定管-ΔA 空白管) ÷W

ε:AsA 在 290m 处摩尔吸光系数为 2.8×103 L/mol/cm;d:96 孔板光径,0.6cm;V 反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4L;106:单位换算系数,1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;W:样本质量,g;V 样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02mL;V 样总:加入试剂一体积,1mL;T:催化反应时间,2min。

实验实例:

1、 取 0.1g 小蓟样本加入 1mL 试剂一进行匀浆研磨,取上清,之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA 空白管=A1-A2=0.5453-0.5287=0.0166,ΔA 测定管=A3-A4=0.7097-0.6137=0.096,按样本质量计算酶活得:APX(U/g 质量)=1.79×(ΔA 测定管-ΔA 空白管) ÷W=1.79×(0.096-0.0166)÷0.1=1.421 U/g 质量。

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒 微量法信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒 微量法报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒 微量法外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供谷氨酸合成酶(GOGAT)活性检测试剂盒 微量法、土壤硝态氮检测试剂盒微量法 微量法、硝酸还原酶(NR)活性检测试剂盒 微量法等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。
工商信息

企业名称

上海博尔森生物科技有限公司

企业信息已认证

企业类型

信用代码

91310117MA1J4K3L3L

成立日期

2020-09-02

注册资本

100

经营范围

一般项目:从事生物科技、医药科技领域內的技术开发、技术咨询、技术服务;仪器仪表、实验室设备及耗材、玻璃制品、电子产品、第一类医疗器械、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)销售;货物或技术进出口(国家禁止或涉及行政审批的货物和技术进出口除外)

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