超氧阴离子含量检测试剂盒 微量法

超氧阴离子含量检测试剂盒说明书

 微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂四：自备氯仿；

2、 标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。

产品说明：

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成 NO_2-，NO_2-在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在 530nm 有特征吸收峰，根据 A₅₃₀值可以计算样本中 O₂^－含量。

技术指标：

最 低检出限：0.001451 μmol/mL

线性范围：0.0019-0.5 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量玻璃比色皿/96 孔板、氯仿和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 植物、动物组织：称取约 0.1g 样本，加入提取液 1mL，充分研磨，12000rpm，4℃，离心 20min，取 20μL 上清测定蛋白含量，其余上清作为待测样本。

2. 血清或培养液：直接测定。

二、测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 530nm，蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备取适量亚硝酸钠标准液，将其稀释为 0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125μmol/mL 的标准溶液，用这些标准管做标准曲线。

3. 操作表

三、超氧阴离子含量计算公式：

注意事项：

1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2、 样本制备好后，立刻进行测定，请勿将样本进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。

3、 试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。

实验实例：

1、 取 0.1g 小鼠肝脏加入 1mL 提取液充分研磨，12000rpm，4℃，离心 20min，取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算?A样本=A测定管-A空白管=0.176-0.043=0.133，标准曲线y=2.9968x+0.0129，计算x=0.04，按样本质量计算酶活得：

超氧阴离子含量（μmol/g 质量）=2x÷W=0.8 μmol/g 质量。

2、 取 0.1g 树叶加入 1mL 提取液充分研磨，12000rpm，4℃，离心 20min，取上清之后按照测定步骤操作，使用 96孔板测得计算?A 样本=A 测定管-A 空白管=0.091-0.043=0.048，标准曲线 y=2.9968x+0.0129，计算 x=0.012，按样本质量计算酶活得：

超氧阴离子含量（μmol/g 质量）=2x÷W=0.24 μmol/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！