ATP-柠檬酸裂解酶（ACL）活性检测试剂盒 紫外分光光度法

ATP-柠檬酸裂解酶（ACL）活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 1 mL 试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

2、 试剂三：临用前加入 5 mL 试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

3、 试剂四：临用前加入 1 mL 试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

4、 试剂五：临用前加入 1 mL 试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

5、 提取液的配制：按提取液一︰提取液二=990︰10（V︰V）的比例配制，根据样本量现配现用，禁止将提

取液二一次性全部加入提取液一混匀分装待用。

产品说明：

ATP-柠檬酸裂解酶（ATP-citrate lyase，ACL）是催化柠檬酸生成乙酰辅酶A的关键胞质酶，其催化产生的乙酰辅酶A是合成脂肪酸与胆固醇等脂类物质的主要原料，并可参与相关重要蛋白的修饰作用，是体内能源物质代谢的枢纽性物质。

在ATP和辅酶A存在的情况下，ACL能将柠檬酸催化裂解为乙酰辅酶A、草酰乙酸、ADP和磷酸盐，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD⁺，导致340nm处光吸收下降。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、天平、台式低温离心机、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、水浴锅、冰盒。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照质量（g）︰提取液体积(mL)为 1︰5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。于 4℃，8000g 离心 10min，取上清，置于冰上待测。

2、细胞或细菌：按照细胞或细菌数量（10⁴个）︰提取液体积（mL）为 500~1000︰1 的比例（建议 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min），于 4℃，8000g 离心 10min，取上清，置于冰上待测。

3、血清（浆）或其他液体：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂一置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min。

3、 操作表 (在 1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂) ：

三、ACL活性计算

实验实例：

1. 取 0.1g 黑麦草，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，于 4℃，8000g 离心 10min，取上清，按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定管= A1 测定-A2 测定=1.549-1.512=0.037，ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白=0.411-0.41=0.001，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.037-0.001=0.036，按样本质量计算得：

ACL 活性（U/g 质量）=1607.7×ΔA÷W=578.772 U/g 质量。

2. 取 0.1g 肝脏组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，于 4℃，8000g 离心 10min，取上清，按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定管= A1 测定-A2 测定=1.165-0.985=0.179，ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白=0.411-0.41=0.001，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.179-0.001=0.178，按样本质量计算得：

ACL 活性（U/g 质量）=1607.7×ΔA÷W=2861.706 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！