胰蛋白酶活性检测试剂盒 微量法

胰蛋白酶活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入 0.5mL 蒸馏水，充分溶解；

2、 工作液的配制：将试剂一、试剂二按 2：97 配制工作液，按需配制，实验前置于 37℃水浴预热 20min 以上。

产品说明：

胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。

胰蛋白酶催化水解 BAEE 的酯键，生成 BA，BA 在 253nm 处有吸收峰，通过测定 253nm 吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，10000 rpm 4℃离心 10 分钟，取上清液，即粗酶液，置冰上待测。或者直接称取 1mg 酶粉，加 1mL 提取液，充分混匀后置冰上待测（为保证实验的准确性建议梯度稀释）。

二、测定步驟：

1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至253nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定：

(1) 空白管：取微量石英比色皿/96 孔板，加入 198μL 工作液，再加入 2μL 蒸馏水，迅速于 253nm 测定 0s 和 60s的吸光度，分别记为 A1、A2，ΔA 空白=A2-A1。

(2) 测定管：取微量石英比色皿/96 孔板，加入 198μL 工作液，再加入 2μL 粗酶液，迅速于 253nm 测定 0s 和 60s的吸光度，分别记为 A3、A4，ΔA 测定=A4-A3。

三、胰蛋白酶活性计算：

注意事项：

1. 实验前用 1～2 个样做预实验，保证吸光值变化在 0.01～0. 15 之间（若使用 96 孔 UV 板，变化范围在 0.01-0.08之间）。

2. 若所测结果 ΔA 测定为负值，可适当将试剂一稀释（2 倍或 4 倍）再进行实验。

实验实例：

1、 取 1.25mg/mL 胰蛋白酶溶液，按照测定步骤操作，使用 96 孔 UV 板测得计算 ΔA 测定=A4-A3=0.363-0.344=0.019，ΔA 空白=A2-A1=0.325-0.324=0.001，按样本质量计算酶活得：

胰蛋白酶（U/mg prot）=2×10⁵×(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷Cpr =2880 U/mg prot。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！