谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性检测试剂盒 微量法

谷胱甘肽 S-转移酶（GST）活性检测试剂盒说明书

 微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液配制：

试剂三：临用前加 2 mL 蒸馏水溶解。

产品说明：

GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST 是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为 GST 具有 GSH-Px 活性，亦称为 non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如 DNA、蛋白质等的功能。注意，GST 催化的反应减少 GSH 含量，但是不增加 GSSG 含量。GST 催化 GSH 与 CDNB 结合，其结合产物的光吸收峰波长为 340nm；通过测定 340nm 波长处吸光度上升速率，即可计算出 GST 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外-可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量石英比色皿/96 孔 UV板和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3 . 血清等液体：直接测定。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 340nm，用蒸馏水调零。

2. 试剂二放在 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）保温。

3. 空白管：取微量石英比色皿，加入 20μL 试剂一，180μL 试剂二和 20μL 试剂三，迅速混匀后于 340nm 测定 10s吸光度记 A1，在 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴 5min 后，快速取出测定吸光度记 A2。

4. 测定管：取微量石英比色皿，加入 20μL 上清液，180μL 试剂二和 20μL 试剂三，迅速混匀后于 340nm 测定 10s吸光度记 A3，25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴 5min 后，快速取出测定吸光度记 A4。

三、GST 活性计算

注意事项：

1. 样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；

2. 细胞中 GST 活性测定时，细胞数目须在 300 万-500 万之间，细胞中 GST 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞；

3. 若样本测定吸光度大于 1，建议对样本用蒸馏水稀释，计算时结果乘以稀释倍数；

4. 测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在 25℃或者 37℃（哺乳动物）。

实验实例：

1、 取 0.1g 月季加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，稀释 50 倍置冰上待测，按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定管=A4-A3=0.7046-0.62=0.0846，ΔA 空白管=A -A1=0.5902-0.5207=0.0695，按样本质量计算得：

GST（U/g 质量）=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W×50（稀释倍数）= 1.737 U/g 质量。

2、 取 0.1g 肺加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，稀释 50 倍置冰上待测，按照测定步骤操作，使用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定管=A4-A3=0.9402-0.5059=0.4343，ΔA 空白管=A2-A1=0.5902-0.5207=0.0695，按样本质量计算得：

GST（U/g 质量）=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W×50（稀释倍数）=41.952 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！