维格列汀中基因毒性杂质检测方案(气质联用仪)

SSL-CA14-937 Excellence in ScienceGCMSMS-163 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区区州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai GCMSMS 法测定维格列汀中氨基甲酸酯和对甲苯磺酸酯类基因毒性杂质 GCMSMS-163 摘要：本文利用岛津公司的 GCMS-TQ8050NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪，建立了一种维格列汀中氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、对甲苯磺苯甲酯、对甲苯磺酸乙酯的测定方法。在0.01~0.2 mg/L浓度范围内各组分线性关系良好，各组分相关系数均达到0.999以上，检出限在 1.9~4.2 ug/L。0.02 mg/L标准品溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于2.3%。0.8 mg/kg加标样品回收率为60.0~98.3%。该方法操作简单，能够有效监测维格列中4种基因毒性杂质的含量。 关键建： GC-MS/MS 基因毒性杂质氨基甲酸酯对甲苯磺酸酯 近年来，随着人们生活水平增加，我国糖尿病患病率逐年增加，糖尿病严重危害人类健康。维格列汀抑制剂因能有效控制血糖，引起低血糖的风险低，且不增加体重，广泛应用于糖尿病的治疗。而维格列汀在生产过程中易产生氨基甲酸酯类和对甲苯磺酸酯类等基因毒性杂质，影响药品的质量。据研究证实氨基甲酸甲酯和氨基甲酸乙酯均能诱发良性或恶性肿瘤，如肺癌和肝癌等。 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8050 NX 气相色谱质谱联用仪 1.2分析条件 色谱柱：SH-Rtx-624，60 m×0.32 mm×1.8 um 柱温程序：60℃_15℃/min_240℃(10 min) 进样口温度：250℃ 流速控制方式：恒线速度方式 线速度：40.8 cm/s 进样方式：不分流进样 给服药的糖尿病人的健康造成潜在的危险。 虽然氨基甲酸酯类广泛认可对人类有害，但相关报道较少，现行标准仅有食品标准 GB5009.223中规定了液态食品中氨基甲酸乙酯的检测方法。为监控药品质量，拟建立维格列汀中氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯的 GC-MS/MS 检测方法。 离子化方式：El 离子源温度：230℃ 色谱质谱接口温度：250℃ 检测器电压：调谐电压+0.6 kV 采集模式：MRM，离子信息见表1 1.3样品前处理 准确角量0.05 g样品于4.0mL样品瓶中，加入1.0 mL丙酮，超声萃取15min， 静止澄清后，萃取液全部转移至另一4.0 mL样品瓶中。按照前述步骤，样品经丙酮重复萃取3次，合并萃取液。萃取液过0.22 um滤膜，氮吹定容为2.0mL， 取 1.0pL上机测试。 结果与讨论 2.1标准溶液谱图 图1标准溶液TIC图 (0.1mg/L) 对甲苯磺酸甲酯 对甲苯磺酸乙酯 图24种基因毒性杂质MRM色谱图 (0.1mg/L) 表14种基因毒性杂质信息 No. 中文名称 英文名称 CAS号 保留时间(min) 定量离子对 碰撞电压(v) 定性离子对 碰撞电压(v) 1 氨基甲酸甲酯 Methyl carbamate 598-55-0 6.337 75.00>45.00 9 75.00>44.00 5 2 氨基甲酸乙酯 Ethyl carbamate 51-79-6 7.279 62.00>44.00 15 74.00>44.00 3 3 对甲苯磺酸甲酯 p-Toluenesulfonic acid， methylester 80-48-8 16.346 155.00>91.00 9 186.00>91.00 21 4 对甲苯磺酸乙酯 p-Toluenesulfonic acid，ethyl ester 80-40-0 17.393 155.00>91.00 9 200.00>91.00 25 2.2标准曲线和检出限 分别配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2 mg/L的基因毒性杂质混合标准溶液，取1.0uL进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，化合物标准曲线如图3所示。根据0.01mg/L标样数据，以3倍信噪比 (ASTM)计算4种化合物的检出限，各化合物检出限以及线性相关系数如表2所示。 对甲苯磺酸甲酯 对甲苯磺酸乙酯 图3标准曲线 表2各组分相关系数及检出限 No. 组分名称 相关系数(R) 检出限(ug/L) 1 氨基甲酸甲酯 0.9998 4.2 2 氨基甲酸乙酯 0.9999 3.9 3 对甲苯磺酸甲酯 0.9998 1.9 4 对甲苯磺酸乙酯 0.9999 3.1 2.3重复性实验 取0.02mg/L标准品溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表3。 表3重复性结果 No. 组分名称 RSD(%) 1 氨基甲酸甲酯 氨基甲酸乙酯 3 对甲苯磺酸甲酯 4 对甲苯磺酸乙酯 2.4加标回收率 将空白样品进行0.8 mg/kg 浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行测定3份样品考察回收率和RSD，具体结果见表4。 表4样品添加回收率结果 No. 组分名称 添加浓度 (0.8 mg/kg) 平均回收率(%) 峰面积RSD (%) 1 氨基甲酸甲酯 95.0 4.3 2 氨基甲酸乙酯 98.3 6.1 3 对甲苯磺酸甲酯 60.0 2.5 4 对甲苯磺酸乙酯 95.0 3.1 结论 本方法采用岛津GCMS-TQ8050NX检测维格列汀药品中的4种基因毒性杂质，在0.01~0.2 mg/L浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.999以上，检出限在1.9~4.2 ug /L。 0.02 mg/L标准品溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于3.0%，精密度良好。0.8 mg/kg 加标样品的回收率为60.0~98.3%。该方法操作较简单，能够有效的监测药品中氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯的含量。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 采用岛津公司的GCMS-TQ8050NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪检测维格列汀中氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯。在0.01~0.2 mg/L浓度范围内各组分线性关系良好，各组分相关系数均达到0.999以上，检出限在1.9~4.2 µg /L。0.02 mg/L标准品溶液连续进样6针，峰面积RSD均小于2.3%。0.8 mg/kg加标样品回收率为60.0%~98.3%。该方法能够有效监测维格列汀中4种基因毒性杂质的含量。