缬沙坦中NDMA、NDEA检测方案(气质联用仪)

SSL-CA14-875Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-157 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区区州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai GCMSMS法测定缬沙坦原料药中遗传毒性杂质NDMA 和NDEA GCMSMS-157 摘要：本文利用岛津 GCMS-TQ8040NX三重四极杆气质联用仪，建立了缬沙坦原料药中遗传毒性杂质 N- 亚硝基二甲胺 (NDMA)、N-亚硝基二乙胺 (NDEA) 的液体进样检测方法。在2.5~300 ug/L 浓度范围内 NDMA、NDEA线性关系良好，相关系数均达到0.999以上。2.5 ug/L标准品溶液连续进林6针，峰面积 RSD 小于4.60%。实际样品加标回收率为 86.6%~123.3%。方法简单、抗干扰能力强，灵敏度高，满足原料药中痕量杂质成分的检测。 关键词： GCMS-TQ8040 NX缬沙坦原料药遗传毒性杂质 NDMA MDEA 亚硝基化合物是一类强致癌有机化合物，亚硝胺化合物由前体物质硝酸盐、亚硝酸盐和胺类通过化学或生物学途径合成。这类物质广泛存在于食品、饮用水、外界环境中。根据 ICH M7 通则对基因毒性杂质的分类，NDMA应属于【第一类：已知的、具有基因毒性(突变性)和致癌性的物质。控制不高于化合物可接受限度(AI)。】根据 WHO 的数据， NDMA 的Al值为 0.005-0.016 ug/kg，换算后为0.375-1.2ug/天。 ARB)， 是多年来高血压治疗领域的主流产品，也是全球市场上最大一类抗高血压药物。近期，缬沙坦原料药中出现NDMA杂质，引发社会关注。值得注意的是对于高血压患者来说，缬沙坦等抗高血压药物需要长期服用，所以对其中的遗传毒性杂质检测要求更为严格。由于药品中的 NDMA、NDEA含量极微，这就对检测方法灵敏度提出了更高的要求。 缬沙坦属于血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(沙坦类， 本文采用岛津 GCMS-TQ8040 NX 建立了缬沙坦原料药中遗传毒性杂质 NDMA、NDEA的检测方法。 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8040 NX 三重四极杆气相色谱-质谱联用仪 1.2分析条件 色谱柱： Rtx-WAX(30 m×0.25 mm×0.25um) 高压进样：250 kPa (1 min) 柱温程序：40℃(1 min)_10℃ /min_120℃_30℃ /min_240℃ (5 min) 离子化方式：El 离子源温度：230℃ 进样口温度：250℃ 色谱质谱接口温度：250℃ 流速控制方式：恒线速度方式 检测器电压：调谐电压+0.5 kV 线速度：44.2 cm/sec 采集模式：MRM，离子信息见表1 进样方式：不分流进样 1.3样品前处理 准确角取 0.5g样品于15mL离心管中，加入5 mL二氯甲烷溶液，10 uL 50 mg/L的 NDMA-D6内标溶液，涡旋混匀1 min， 将混匀的样品转移至离心管中，4000 rmp 离心2.5 min， 用注射器吸取约2 ml上清液经0.45um尼龙滤膜过滤至2ml进样小瓶中，直接上 GCMSMS 分析。 结果与讨论 2.1标准溶液谱图 标准溶液 MRM图见图1，各组分 MRM 图见图2。 图1标准溶液TIC图 (300pg/L) 5.0- 2.5 0.0 7.00 8.5 NDEA 图2各组分MRM图 (2.5ug/L) 表1各组分信息 No. 名称 CAS号 保留时 定量离子对 CE 定性离子对1 CE 定性离子对2 CE 间(min) 1 NDMA-D6 1 17829-05-9 7.156 80.00>50.1 6 80.00>46.10 24 80.00>48.10 12 2 NDMA 62-75-9 7.161 74.00>42.10 21 74.00>44.10 6 3 NDEA 55-18-5 8.234 102.00>85.1 0 6 102.00>44.1 0 12 2.2标准曲线和检出限 分别配制浓度为2.5、5、10、25、50、80、100、300 ug/L 的混合标准溶液，加入NDMA-D6作为内标，使内标浓度为 100 ug/L， 取1uL进样，以浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标绘制标准曲线，化合物标准曲线如图3所示。使用2.5 ug/L标样，对仪器灵敏度进行测试，信噪比结果、线性相关系数见表2。 图3化合物标准曲线 表2相关系数及灵敏度测试结果 ID 组分名称 相关系数(R) 2.5 ug/L标准溶液信噪比ASTM 1 NDMA 0.9999 23.39 2 NDEA 0.9998 35.81 2.3重复性实验 取2.5 ug/L标准液溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表3。 表3重复性测试结果 No 组分 面积1 面积2 面积3 面积4 面积5 面积6 RSD(%) 1 NDMA 772 756 768 705 776 770 3.52 2 NDEA 552 520 552 563 508 572 4.60 2.4加标回收率 对6个缬沙坦原料药样品进行25 ng/g、250 ng/g、500 ng/g 加标， NDMA 结果见表4， NDEA结果见表5。 表4 NDMA样品测试及回收率结果 样品测试 加标量(25ng/g) 加标量(250ng/g) 加标量 (500ng/g) No. 结果 加标测试结果 加标回收率 加标测试结果 加标回收率 加标测试结果 加标回收率(%) (ng/g) (ng/g) (%) (ng/g) (%) (ng/g) 1 0.00 23.15 92.58 233.93 93.57 540.35 108.07 2 0.00 29.10 116.40 230.20 92.08 526.28 105.26 3 0.00 26.82 107.26 240.28 96.11 511.59 102.32 4 13.61 35.26 86.60 233.40 87.92 630.04 123.28 5 0.00 27.51 110.05 244.53 97.81 519.38 103.88 6 0.00 22.59 90.37 232.90 93.16 545.94 109.19 表5 NDEA样品测试及回收率结果 样品测试 加标量(25ng/g) 加标量(500ng/g) No. 结果 加标测试结果 加标回收率 加标测试结果 加标回收率 加标测试结果 加标回收率 (ng/g) (ng/g) (%) (ng/g) (%) (ng/g) (%) 1 7.71 39.31 126.41 257.72 100.00 535.35 105.53 2 10.69 40.51 119.27 266.07 102.15 521.41 102.14 3 13.05 37.08 96.12 260.60 99.02 506.86 98.76 4 12.47 37.09 98.51 255.30 97.13 624.21 122.35 5 0.00 24.18 96.71 253.50 101.40 514.58 102.92 6 0.00 27.55 110.18 234.99 94.00 540.89 108.18 结论 本方法采用岛津 GCMS-TQ8040 NX 液体进样检测遗传毒性杂质 NDMA、NDEA， 在2.5~300 ug/L浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.999 以上。2.5 ug/L标准品溶液连续进样6针，峰面积RSD 小于 4.60%，精密度良好。对6个样品进行低、中、高浓度加标，加标回收率为 86.6%~123.3%。该方法简单方便，灵敏度好，满足缬沙坦原料药中痕量遗传毒性杂质 NDMA、NDEA 的检测。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 利用岛津GCMS-TQ8040 NX三重四极杆气质联用仪，建立了缬沙坦原料药中遗传毒性杂质N-亚硝基二甲胺（NDMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）的液体进样检测方法。在2.5~300 µg/L浓度范围内NDMA、NDEA线性关系良好，相关系数均达到0.999以上。2.5 µg/L标准品溶液连续进样6针，峰面积RSD小于4.60%。实际样品加标回收率为86.6%~123.3%。方法简单、抗干扰能力强，灵敏度高，满足原料药中痕量杂质成分的检测。