二甲双胍中NDMA检测方案(气质联用仪)

SSL-CA19-200 Excellence in ScienceGCMSMS-186 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区区州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996 GC-MS/MS法测定二甲双胍药品中NDMA含量 GCMSMS-186 摘要：本文使用岛津公司 GCMS-TQ8050 NX 建立了一种检测二甲双胍药品中N-亚硝基二甲胺 (NDMA) 的方法。在浓度范围0.25~100 ng/mL 线性关系良好，相关系数为0.9990， 0.25 ng/mL标液信噪比(S/N) 为14.5。0.5、1和5 ng/mL标液分别平行进样6次，峰面积RSD%分别为 4.03、3.30和2.76%。某二甲双胍成品药中NDMA检测平均值为13.6 ng/g。 20、40和 100 ng/g三个浓度水平加标平均回收率分别为85.0、87.0和86.6%。该方法灵敏度高重复性好，可以很好的应用于二甲双胍原料药及成品药中NDMA含量的检测。 关键词：三重四极杆气相色谱质谱联用仪二甲双胍 NDMA N-亚硝基二甲胺(N-Nitrosodimethylamine，NDMA)是一种遗传毒性杂质，在 ICHM7 指南中明确该化合物具有较高致癌性，对实验动物致癌性证据充分。 最近两年该物质屡屡在化学药品中被发现，造成行业内重大影响。2018年7月NDMA在治疗高血压的药物缬沙坦中被发现，2019年9月治疗胃酸分泌疾病的药物雷尼替丁中也发现该物质，2019年12月有 I实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气质谱联用仪 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rtx-Wax， 30 m×0.25 mmlD× 柱温程序：60℃(0.5 min)_15℃/min_ 150℃ 流速控制方式：恒线速度方式 线速度：51.6mL/min 进样方式：不分流 离子化方式：EI I样品前处理 报道称治疗糖尿病的药物二甲双胍中可能含有不安全水平的 NDMA， FDA 随即开始着手检测美国市场的二甲双胍中NDMA 的污染情况。 目前 NDMA的检测方法有顶空+GCMS 方法、GCMS 法、GC-MS/MS 法、LC-MS/MS法，需要根据各种药物的物理与化学性质以及限量要求选择合适的方法。本文采用盐酸溶液溶解，二氯甲烷萃取，GC-MS/MS检测，建立了二甲双胍中 NDMA的检测方法。 称取二甲双胍原料药 0.5g，如果是成品药则先将药品粉碎均匀再称取含二甲双胍有效成分0.5g的样品，记录精确质量。加入1N 盐酸溶液10mL，振摇并涡旋使之溶解(成品药可能会有少量残渣不溶，不影响检测)，加入二氯甲烷10mL， 充分振摇，涡旋 1 min， 5000 rpm 离心8 min， 吸取下层有机相经0.22um滤膜过滤，收集滤液约1mL，待测。 |结果与讨论 3.1 NDMA谱图 图1 NDMA质量色谱图(0.25ng/mL) 表 1 NDMA组分信息 中文名称 CAS号 保留时间 定量离子对 定性离子对 (min) N-亚硝基二甲胺 62-75-9 4.988 74.00>44.10 74.00>42.10 3.2标准曲线和灵敏度 配制8个不同浓度的标准品溶液，制作校准曲线，含量分别为0.25、0.5、1、5、10、20、50和100 ng/mL.以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，标准曲线如图2所示。线性相关系数及 0.25 ng/mL标液信噪比如表2所示 Area 图 2 NDMA标准曲线(0.25~100 ng/mL) 表2NDMA线性相关系数及信噪比6(0.25ng/mL) 组分名称 相关系数(R) S/N NDMA 0.9990 14.5 3.3重复性实验 取浓度为 0.5、1、5ng/mL的 NDMA 标准溶液，分别重复进样6次，各浓度水平 RSD%见表3。 表3 NDMA重复性结果(n=6) 浓度 峰面积 RSD% 2 3 4 5 6 (ng/mL) 0.5 39，550 37，822 42，398 40，576 41，752 40，231 4.03 1 86，238 84，742 84，472 78，887 86，369 83，050 3.30 5 333，760 321，949 326，196 321，469 345，785 329，887 2.76 3.4加标回收率 以某品牌的二甲双胍成品药为检测对象，平行检测6次，检测结果如表4所示。以此样品为本底进行加标实验，分别加标20、40、100ng/g，每个加标水平平行检测6次，检测结果如表5所示。 图3二甲双胍成品药检测谱图 表4二甲双胍成品药NDMA 检测结果 样品检测值 (ng/g) RSD% 平均值(ng/g)1 2 3 4 5 6 13.6 13.8 12.4 14.2 14.0 14.2 4.50 13.6 表5二甲双胍成品药 NDMA加标检测结果 加标浓度 本底值 加标检测值(ng/g) 平均值 RSD% 回收率 (ng/g) (ng/g) 1 2 3 5 6 (ng/g) (%) 20 13.6 28.6 31.0 29.6 32.0 31.2 30.8 30.6 3.94 85.0 40 13.6 45.8 47.0 49.8 47.0 50.6 50.4 48.4 4.39 87.0 100 13.6 101.2 98.8 101.4 99.4 99.0 100.8 100.2 1.20 86.6 ■结论 本方法采用岛津 GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪建立了一种检测二甲双胍药品中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的方法。在浓度范围0.25~100 ng/mL线性关系良好，相关系数R为 0.9990，0.25ng/mL标液信噪比为14.5。0.5、1和5 ng/mL标液分别平行检测6次，峰面积RSD%分别为4.03、3.30和2.76%。对某品牌二甲双胍成品药中NDMA 含量进行了检测，测得含量为 13.6 ng/g。 20、40和100 ng/g三个浓度水平加标平均回收率分别为85.0、87.0和86.6%。该方法灵敏度高重复性好，可以很好的应用于二甲双胍原料药及成品药中 NDMA含量的检测。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai 本方法采用岛津GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪建立了一种检测二甲双胍药品中N-亚硝基二甲胺（NDMA）的方法。在浓度范围0.25~100 ng/mL线性关系良好，相关系数R为0.9990，0.25 ng/mL标液信噪比为14.5。0.5、1和5 ng/mL标液分别平行检测6次，峰面积RSD%分别为4.03、3.30和2.76%。对某品牌二甲双胍成品药中NDMA含量进行了检测，测得含量为13.6 ng/g。20、40和100 ng/g三个浓度水平加标平均回收率分别为85.0、87.0和86.6%。该方法灵敏度高重复性好，可以很好的应用于二甲双胍原料药及成品药中NDMA含量的检测。