药物中硫酸烷基酯类遗传毒性杂质检测方案(气质联用仪)

SSL-CA14-870 Excellence in ScienceGCMS-284 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区区州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai GCMS 法测定药物中硫酸烷基酯类遗传毒性杂质 GCMS-284 摘要：本文利用岛津公司的 GCMS-QP2020 NX 气相色谱-质谱联用仪，建立了一种药品中硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯的测定方法。在10~1000 ug/L 浓度范围内各组分线性关系良好，相关系数均达到0.998以上，仪器检出限为 0.36~0.58 ug/L。 10 ug/L标准品溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于2.48%，精密度良好。3 mg/kg 加标浓度的加标回收率为 95.16%-100.42%。该方法简单方便，能够有效的检测药品中硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯的含量。 遗传毒性杂质是指能够引起 DNA突变、染色体断裂或者 DNA 重组的物质。其主要来源于原料药合成过程中的起始物料、中间体、试剂和反应副产物。目前基因毒性列表中有1574种致癌物质，其中苯并芘、甲磺酸酯类、偶氮苯类、N-亚硝胺等物质属于高基因毒性物质。因遗传毒性杂质毒性较强，对用药的安全性产生了强烈的威胁。近年来，已上市药品中发现痕量的遗传毒性杂质残留而发生大范围的医疗事故，继而被召回的 实验部分 1.1仪器 GCMS-QP2020NX气相色谱质谱联用仪 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-35MS (30m×0.25mm×0.25 um) 进样口温度：180℃ 流速控制方式：恒线速度方式 线速度：36.3cm/sec 案例时有发生，给药厂造成了巨大的经济损失。 硫酸二甲酯、硫酸二乙酯以及硫酸二异丙酯等硫酸烷基酯可与 DNA发生烷基化反应，诱发癌症，所以在药品生产过程中也受到了监控。欧洲医药评价署(EMA)发布了遗传毒性杂质的最大摄取量为1.5 ug/d。 本文利用岛津GCMS-QP2020 NX建立了一种药品中硫酸烷基酯类遗传毒性杂质的检测方法。 进样方式：不分流进样 高压进样：250kPa (1.5 min) 离子化方式：EI 离子源温度：200℃ 色谱质谱接口温度：280℃ 检测器电压：调谐电压+0.3kV 采集模式： SIM，离子信息见表1 1.3样品前处理 称取可溶于有机溶液的药品0.04g于离心管中，准确加入2mL乙酸乙酯，充分震荡均匀，超声萃取10 min，过0.22um有机滤膜后直直上 GCMS分析。 结果与讨论 2.1硫酸烷基酯类混合标准溶液色谱图 图1硫酸烷基酯类混合标准溶液TIC图(1000 ug/L) 图21硫酸烷基酯类混合标准品溶液溶量色谱图(50ug/L) 表1各组分信息 No. 中文名称 英文名称 CAS号 保留时间 定量离子 定性离子 1 硫酸二甲酯 dimethyl sulfate 77-78-1 5.968 95 96，125 2 硫酸二乙酯 diethyl sulfate 64-67-5 8.575 139 125，111 3 硫酸二异丙酯 di-iso-propyl sulfate 2973-10-6 9.581 167 87，125 2.2标准曲线和检出限 分别配制10、50、100、250、500、800、1000 ug/L的硫酸二甲酯、硫酸二乙酯以及硫酸二异丙酯的混合标准溶液，取1uL进样， 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线。根据10 ug/L 标样数据，以3倍信噪比 (ASTM)计算出三者的仪器检出限，各化合物检出限以及线性相关系数如表2所示。 图3硫酸烷基酯类化合物标准曲线 表2各组分线性方程、相关系数及检出限 ID 组分名称 斜率 截距 权重 相关系数(R) 检出限(ug/l) 1 硫酸二甲酯 589.9 -200.4 1/C² 0.9989 0.53 2 硫酸二乙酯 284.4 -421.3 1/C2 0.9999 0.36 3 硫酸二异丙酯 356.3 -610.1 1/C2 0.9999 0.58 2.3重复性实验 取 50 ug/L标准品溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表3。 表3硫酸烷基酯类化合物重复性结果 ID 组分名称 峰面积 RSD(%) 1 2 3 4 5 6 平均 1 硫酸二甲酯 31918 32662 32342 31656 31818 30608 31834 2.21 2 硫酸二乙酯 13973 14215 14169 14306 13690 13413 13961 2.48 3 硫酸二异丙酯 17421 17699 17538 17942 17183 17114 17483 1.79 2.4加标回收率 称取可溶于有机溶液的药品 0.04g于离心管中，加入60 uL 浓度为 20 ug/mL 的标准溶液，得到三种硫酸酯类浓度为3.0 mg/kg 的加标样品，用乙酸乙酯定容至2mL，充分震荡均匀，超声萃取 10 min， 过 0.22 um 有机滤膜后采用 GCMS分析，平行3份样品考察回收率和 RSD。 表4+ t硫酸烷基酯类化合物添加回收率结果 ID 组分名称 浓度(mg/kg) 平均加标回收率 RSD(%) 1-1 1-2 2-1 2-2 3-1 3-2 平均 1 硫酸二甲酯 3.045 2.705 2.805 2.885 2.895 2.935 2.88 95.93 4.01 2 硫酸二乙酯 271 2.74 2.86 2.91 2.93 2.975 2.855 95.16 3.74 3 硫酸二异丙酯 2.855 2.875 3.025 3.065 3.115 3.14 3.015 100.42 3.99 结论 本方法采用岛津GCMS-QP2020检测药品中硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯等硫酸烷基酯类遗传毒性杂质， 在10~1000 ug/L 浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.998以上，仪器检出限为 0.36~0.58 ug/L。10 ug/L标准品溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于2.48%，精密度良好。3 mg/kg 加标浓度的加标回收率为95.16%-100.42%。该方法简单方便，能够有效的检测药品中硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯的含量。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 本文利用岛津公司的GCMS-QP2020 NX气相色谱-质谱联用仪，建立了一种药品中硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯的测定方法。在10~1000 µg/L浓度范围内各组分线性关系良好，各组分相关系数均达到0.998以上，方法检出限在0.36~0.58 µg/L。10 µg/L标准品溶液连续进样6针，峰面积RSD均小于2.48%，精密度良好。3 mg/kg加标浓度的加标回收率为95.16%-100.42%。该方法简单方便，能够有效的监测药品中硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二异丙酯的含量。