雷贝拉唑钠中杂质检测方案(液质联用仪)

LAAN-A-LM-C008 ApplicationnNo.C97Newshttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2014年12月 ApplicationNews LC/MSLiquid Chromatography Mass Spectrometry 使用 Trap-Free二维HPLC 和 LC/MS/MS 测定药物中的杂质 Analysis of Impurities in Pharmaceutical Ingredients Using Trap-Free Two-Dimensional HPLC and Triple QuadrupoleLC/MS/MS [LCMS-8040] 在药物(如原料、最终制剂和仿制药)、食品(如健康食品和营养辅助食品)、精细化工产品(如溶剂、涂料、表面活性剂和其他多种合成品)等广泛领域，需要对产品中所含微量杂质的种类、数量及安全性进行管理和检查，从而提高产品质量。目前，使用 LC/MS/MS 质谱仪对微量杂质进行测定与分析已成为备受瞩目的方法。通常， 采用 HPLC-UV 法进行杂则测定，但该方法无法将 HPLC 中使用的不挥发性流动相直接应用到 LC/MS分析中。因此测定时需要将其替换成挥发性流动相。该操作不仅步骤繁琐，而且会导致洗脱顺序变化和丢失主成分生成的杂质，因此测定时需要谨慎操作。 本文向您介绍使用 Trap-Free 二维 HPLC， 对不挥发性流动相中检测到的杂质，在不进行预处理的条件下在线转换为挥发性流动相，并使用三重四重杆液质联用仪 LCMS-8040 进行分析的示例。 使用不挥发性流动相的HPLC分析(第一维) HPLC Analysis Using Non-Volatile Mobile Phase (1st Dimension) 本次分析将市售售雷贝拉唑钠作为试验药物，制备1mg/mL的试验溶液，根据日本药典中规定的分析条件(表1)进行了测定。使用磷酸缓冲液作为流动相，该溶液无法直接注入到 LC/MS。 Analytical Conditions (1st Dimension) 色谱柱 Shim-pack VP-ODS (150 mmL.×4.6 mml.D.， 4.6 um) 流动相 甲醇/50mmol/L磷酸盐(钠盐)缓冲液 pH7.0 (3/2) 流速 1.0 mL/min. 柱温 30℃ 进样体积 20uL 检测器 UV 290 nm 使用图1所示仪器配置 Trap-Free 二维 HPLC 与 LC/MS/MS 进行了分析。流动相的流路取决于每次操作关联的阀位置，图1中的不挥发性流动相的流路用红色表示，挥发性流动相的流路用蓝色表示，馏分杂质的峰捕捉样品环用绿色表示。 图1流路图Flow Diagram 使用本系统分析雷贝拉唑钠 1 mg/mL溶液，图2为得到的UV色谱图。由图可知，在5.3分钟处主成分的雷贝拉唑被洗脱下来，并在其前后可以确认到多个杂质峰。将图中的4种杂质馏分捕集到峰捕捉样品环中。 图2雷贝拉唑钠的 UV 色谱图(第一维) UV Chromatogram of Rabeprazole Sodium (1st Dimension) 使用挥发性流动相的LC/MS分析(第二维) LC/MS Analysis Using MS Compatible Mobile Phase (2nd Dimension) 收集到样品环的杂质(uk1~uk4)通过阀的切换被二维输液单元输送的挥发性流动相排出，并分别导入到 LC/MS。表2为第二维分析条件。 表2分析条件(第二维) Analytical Conditions (2nd Dimension) 色谱柱 ： Shim-pack XR-ODS (50 mm L.×2.0 mm I.D.， 2.2 um) 流动相A ： 5mmol/L醋酸铵-纯水 流动相B ： 甲醇 流速 ： 0.2 mL/min. 柱温 ： 30℃ 进样体积 ： 20 pL(样品环体积) 检测器 ： UV 290nm， MS Q3 扫描(正极和负极模式) 如图3所示，使用LabSolutions LCMS 的数据浏览器功能，对空白测定与样品测定得到的 UV 色谱图进行比较，可以确认第二维色谱柱中目标成分的洗脱位置。根据Q3扫描分析结果，分析该峰洗脱时间观测到的离子，可推测目标杂质的分子量。uk-1中作为空白数据没有的峰，可知正模式的 m/z 为376，负模式的m/z为374，从而得知 uk-1为具有分子量375的杂质。以同样方法分析每次循环的 LC/MS分析数据，表3为分析结果。 图3娄数据浏览器显示的分析示析(uk-1) Analysis Example Using Data Browser (uk-1) 表3各杂质的LC/MS测定结果Analytical Results of Respective Impurities by LC/MS compounds content percentage(%) m/z Deduced positive negative MW rabeprazole 99.045 360.20 358.15 359 uk-1 0.433 376.15 374.15 375 uk-2 0.081 394.15 392.10 393 uk-3 0.023 344.20 343 uk-4 0.046 270.20 269 利用 LC/MS/MS 进行分析，不仅可获得杂质的分子量信息，还可以使用产物离子扫描对主成分和杂质的碎片图谱进行比较，从而预测杂质的结构。图4为主成分与 uk-1的产物离子扫描结果示例。根据Q3扫描的结果，可将 uk-1的分子量判断为375，与主成分雷贝拉唑的质量差为16Da。另外，比较两者的产物离子扫描图，发现有很多相同的碎片。由此可知， uk-1的结构与主成分非常相似。而且，图4红框中的碎片离子分子量相差16Da。由此可推测在该离子所示位置产生了结构差异。图4为 uk-1的推测结构。 综上所述，通过 Trap-Free 二维 HPLC 和LC/MS/MS 进行测定，在保持不挥发性流动相的条件下，可以高精度识别杂质峰，并推测其结构。 图4 雷贝拉唑与 uk-1 的 MS/MS分析结果MS/MS Analysis of Rabeprazole and uk-1 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ( 400-650-0439 ) ( 免责声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 使用LCMSMS质谱仪对药物中微量杂质进行测定与分析已经成为常用方法。通常，采用HPLC-UV方法进行杂质测定，但该方法无法将HPLC中使用的不挥发性流动相直接应用到LCMSMS分析中。因此需要将其替换成挥发性流动相，但该操作步骤繁琐，且会导致洗脱顺序变化和丢失主成分生成杂质。本文介绍使用Trap-Free二维HPLC，分析雷贝拉唑钠样品，对不挥发性流动相中检测到的杂质。在不进行预处理的条件下在线转换为挥发性流动相，并使用三重四极杆液质联用仪LCMS-8040进行分析。可以高精度识别杂质峰并推测其结构。