水中抗生素 残留的测定

 1. 实验部分1.1 实验仪器及耗材仪器配置：Shimadzu LC-30A 与 LCMS-8050 联用系统； 色谱柱：Shim-pack GIST C18，100×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-04)； 固相萃取小柱：InertSep HLB 200 mg/6mL (P/N：5010-81976）； SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341-05）； LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）； SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）； SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）； SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。  1.2 分析条件 UHPLC 条件 色谱柱：Shim-pack GIST C18，100×2.1 mm，2 μm (P/N：227-30001-04) 流 速：0.3 mL/min 进样量：5 μL 柱 温：40 ℃ 流动相： A：0.1%甲酸水B：甲醇 梯度洗脱程序如下：  时间（Min）0 3 8 11 12 15 A（%）90 80 65 5 90 90 B（%）10 20 35 95 10 10 质谱条件 离子化模式：ESI，正离子扫描 扫描模式：多反应监测(MRM) 碰撞气：氩气加热气：氮气10 L/min 雾化气：氮气 3 L/min 干燥气：氮气 10 L/min 接口温度： 300℃ DL温度：250 ℃ 加热模块温度：400 ℃ 延迟时间： 1 ms 各化合物MRM参数见下表序号 兽药 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias CE Q3 Pre Bias 1 磺胺醋酰 215.0 156.0 -10 -11 -27 215.0 92.2 -11 -24 -14 2 甲硝唑 172.0 128.1 -11 -16 -20 172.0 82.1 -11 -25 -30 3 地美硝唑 142.0 96.1 -12 -17 -15 142.0 95.2 -12 -23 -15 4 磺胺异嘧啶 279.0 124.1 -13 -22 -19 279.0 186.0 -13 -17 -17 5 磺胺嘧啶 251.0 156.1 -12 -16 -26 251.0 108.1 -12 -23 -17 6 磺胺噻唑 255.9 156.0 -12 -15 -26 255.9 108.1 -12 -23 -16 7 替硝唑 247.9 121.1 -12 -16 -18 247.9 128.1 -11 -21 -20 8 磺胺吡啶 249.9 156.0 -12 -16 -26 249.9 108.1 -11 -25 -17 9 磺胺甲基嘧啶 265.0 108.1 -12 -26 -17 265.0 156.0 -12 -17 -13 10 甲氧苄啶 291.0 230.1 -10 -24 -22 291.0 123.1 -10 -24 -19 11 麻保沙星 363.0 320.1 -10 -16 -13 363.0 345.2 -10 -22 -21 12 氟罗沙星 369.9 326.3 -18 -19 -29 369.9 269.2 -18 -27 -23 13 磺胺甲噻二唑 270.8 156.0 -12 -15 -25 270.8 108.1 -13 -25 -17 14 氧氟沙星 361.9 318.2 -10 -20 -30 361.9 261.1 -10 -28 -25 15 伊诺沙星 321.0 303.1 -11 -22 -30 321.0 232.1 -11 -36 -22 16 培氟沙星 334.0 316.1 -15 -22 -30 334.0 290.2 -15 -19 -28 17 磺胺甲氧哒嗪 281.0 156.0 -13 -17 -26 281.0 108.1 -13 -26 -16 18 磺胺二甲嘧啶 279.0 186.0 -13 -18 -17 279.0 124.1 -13 -24 -19 19 奥硝唑 219.8 128.1 -10 -16 -20 219.8 82.1 -11 -30 -30 20 诺氟沙星 319.9 302.1 -11 -22 -30 319.9 276.1 -10 -18 -27 21 环丙沙星 331.9 314.1 -11 -22 -30 331.9 231.1 -11 -37 -22 22 磺胺对甲氧嘧啶 280.9 156.0 -10 -17 -14 280.9 108.1 -10 -26 -16 23 磺胺氯哒嗪 284.9 156.1 -10 -15 -14 284.9 108.1 -13 -25 -17 24 恩诺沙星 360.0 316.2 -10 -20 -30 360.0 342.1 -10 -23 -21 25 达氟沙星 357.9 340.1 -10 -24 -21 357.9 82.1 -10 -44 -30 26 洛美沙星 352.0 265.1 -10 -24 -25 352.0 308.2 -10 -18 -30 27 磺胺甲恶唑 254.0 156.0 -12 -16 -25 254.0 108.1 -12 -24 -17 28 奥比沙星 396.0 352.1 -11 -19 -22 396.0 295.0 -11 -25 -29 29 双氟沙星 399.9 382.1 -11 -23 -24 399.9 356.1 -11 -21 -15 30 磺胺间甲氧嘧啶 281.0 156.0 -13 -18 -14 281.0 108.1 -13 -27 -17 31 沙拉沙星 386.0 368.1 -11 -23 -23 386.0 342.1 -11 -20 -21 32 磺胺间二甲氧嘧啶 310.9 156.1 -11 -21 -26 310.9 108.1 -11 -29 -17 33 磺胺邻二甲氧嘧啶 310.9 156.0 -14 -18 -25 310.9 108.1 -11 -27 -17 34 斯帕沙星 393.0 349.1 -11 -21 -22 393.0 292.1 -11 -26 -28 35 螺旋霉素 843.2 174.2 -22 -35 -29 843.2 142.1 -22 -35 -12 36 替米考星 869.4 696.4 -20 -42 -32 869.4 174.1 -20 -45 -30 37 磺胺喹恶林 300.8 156.0 -10 -17 -14 300.8 108.0 -13 -26 -17 38 恶奎酸 262.0 244.0 -12 -20 -23 262.0 216.0 -11 -29 -20 39 吉他霉素 772.2 109.0 -22 -42 -17 772.2 174.1 -22 -31 -15 40 交沙霉素 828.3 109.0 -20 -45 -17 828.3 174.2 -20 -33 -16 41 氟甲喹 261.9 244.1 -12 -20 -23 261.9 202.0 -12 -33 -18 42 甲砜霉素 353.9 185.1 17 21 12 353.9 290.1 17 13 14 43 氟苯尼考 355.9 336.1 18 11 12 355.9 185.1 17 20 12 44 氯霉素 320.8 152.1 16 17 15 320.8 257.1 16 11 12 *定量离子对 1.3 样品前处理1.3.1样品准备精密量取样品500 mL于烧杯中，加1.0 g Na2EDTA，超声溶解，盐酸调pH至4.0，待净化。1.3.2 样品净化InertSep HLB 500 mg/6 mL 5 mL甲醇、5 mL水活化，弃去流出液；待净化液以5-7 mL/min的流速上样，弃去流出液；6 mL水以5-7 mL/min的流速清洗，弃去流出液；减压抽干小柱10 min；5 mL甲醇-乙酸乙酯（50：50）以1-2 mL/min的流速洗脱，收集流出液；将收集的洗脱液于35℃下氮吹至1 mL以下，用20%甲醇水溶液定容至1 mL，涡旋混匀，过0.22 μm微孔滤膜，供LC-MS/MS分析。流程图见图1。2. 结果及讨论2.1 标准品的MRM色谱图2.2 自来水中44种抗生素的LC-MS/MS检测添加回收结果将空白样品进行2.0 ng/L 和20.0 ng/L浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：2.0 ng/L加标浓度的加标回收率为61.4%-115.5%，RSD为2.19%-16.60%；20.0 ng/L加标浓度的加标回收率为61.20%-115.8%，RSD为1.58%-13.07%。序号 兽药 添加水平（2.0 ng/L） 添加水平（20.0 ng/L） 回收率（%） RSD(%) 回收率（%） RSD(%) 1 磺胺醋酰 84.1 7.66 93.2 4.51 2 甲硝唑 88.9 3.12 101.4 5.07 3 地美硝唑 93.2 4.85 103.8 4.48 4 磺胺异嘧啶 75.5 6.91 61.2 3.32 5 磺胺嘧啶 79.0 8.39 79.3 2.34 6 磺胺噻唑 76.2 6.03 76.0 1.58 7 替硝唑 92.6 5.59 105.7 5.11 8 磺胺吡啶 73.6 10.17 78.3 3.74 9 磺胺甲基嘧啶 79.4 9.00 73.8 4.97 10 甲氧苄啶 89.5 4.36 93.0 4.46 11 麻保沙星 64.8 13.75 101.0 11.76 12 氟罗沙星 77.9 7.26 105.8 12.79 13 磺胺甲噻二唑 75.6 4.70 77.7 4.59 14 氧氟沙星 68.9 14.18 103.5 13.07 15 伊诺沙星 68.6 11.02 105.2 10.27 16 培氟沙星 68.4 9.88 105.1 12.72 17 磺胺甲氧哒嗪 76.9 11.68 75.5 4.16 18 磺胺二甲嘧啶 79.1 8.53 70.1 4.37 19 奥硝唑 95.8 3.00 106.0 5.13 20 诺氟沙星 69.2 16.60 107.1 10.51 21 环丙沙星 72.1 12.87 96.7 12.47 22 磺胺对甲氧嘧啶 77.7 9.64 72.5 4.00 23 磺胺氯哒嗪 77.0 6.00 76.7 4.96 24 恩诺沙星 68.9 8.29 115.8 12.01 25 达氟沙星 62.3 12.21 112.0 13.22 26 洛美沙星 75.4 7.56 93.4 13.14 27 磺胺甲恶唑 80.3 8.43 85.8 6.33 28 奥比沙星 88.1 8.09 88.0 8.35 29 双氟沙星 76.5 8.36 106.9 10.83 30 磺胺间甲氧嘧啶 75.5 9.08 76.5 3.94 31 沙拉沙星 81.2 15.96 87.6 11.57 32 磺胺间二甲氧嘧啶 75.8 2.79 67.0 5.31 33 磺胺邻二甲氧嘧啶 78.3 7.49 72.2 3.56 34 斯帕沙星 81.2 7.99 72.0 8.36 35 螺旋霉素 61.4 11.06 74.8 5.57 36 替米考星 64.4 5.98 80.4 2.99 37 磺胺奎恶啉 63.5 10.54 69.0 6.57 38 恶奎酸 91.5 6.63 96.9 3.32 39 吉他霉素 88.1 4.23 83.3 4.69 40 交沙霉素 83.4 7.24 76.6 4.32 41 氟甲奎 92.6 13.33 103.7 4.15 42 甲砜霉素 115.5 3.03 94.4 6.11 43 氟苯尼考 101.9 9.18 98.1 6.65 44 氯霉素 101.6 2.19 97.6 5.52 3. 结论采用岛津的InertSep HLB产品对自来水样品进行净化富集，Shim-pack GIST C18色谱柱进行分离，串联质谱LCMS-8050检测分析。对空白样品进行2.0 ng/L 和20.0 ng/L浓度加标后，按照上述前处理方法处理后上机，平行3份样品考察回收率和RSD，具体结果如下：2.0 ng/L加标浓度的加标回收率为61.4%-115.5%，RSD为2.19%-16.60%；20.0 ng/L加标浓度的加标回收率为61.20%-115.8%，RSD为1.58%-13.07%，回收率高，重现性好。该方法适用于水中喹诺酮类、磺胺类、硝唑类、大环内酯类和氯霉素类等抗生素残留的同时测定。